论文摘要
目的观察去甲肾上腺素（norepinepherine,NE）诱导的心肌细胞P物质（SP）、降钙素基因相关肽（CGRP）表达、心肌细胞凋亡,以及SP对心肌细胞凋亡的影响。方法（1）第一部分实验选用1～3天龄的Sprague-Dawley（SD）大鼠建立新生大鼠心肌细胞体外培养模型,采用免疫细胞化学染色方法对心肌细胞进行鉴定:选用8孔培养第4～5天呈亚融合状态下细胞随机分为2组,每组4孔:1组为阴性对照组;2组为实验组。（2）第二部分实验选用20孔培养第4～5天呈亚融合状态下细胞随机分为5组,每组4孔:1组为对照组;2组为1h实验组;3组为3h实验组;4组为6h实验组;5组为12h实验组。2～5组所施加的NE终浓度均为10-8mol·L-1。细胞培养基内分别加入NE共培后,取样本进行测定。采用免疫细胞化学（IC）染色方法观察NE诱导后心肌细胞内SP、CGRP表达水平的变化。（3）第三部分实验选用16孔培养第4～5天呈亚融合状态下细胞随机分为4组,每组4孔:1组为对照组;2组为1h实验组;3组为3h实验组:4组为6h实验组。2～4组所施加的NE终浓度均为10-8mol·L-1。细胞培养基内分别加入NE共培后,取样本进行测定。用tunel法观察NE诱导后心肌细胞的凋亡。（4）第四部分实验选用12孔培养第4～5天呈亚融合状态下细胞随机分为3组,每组4孔:1组为对照组;2组为NE实验组;3组为SP+NE组。2、3组NE的终浓度为10-8mol·L-1,3组SP终浓度为10-8mol·L-1,与NE同时加入细胞培养基共培1小时后,取样本进行测定。采用流式细胞术进行检测,观察SP对NE诱导后心肌细胞凋亡的影响。结果（1）培养细胞上清液中加入去甲肾上腺素（NE）进行诱导,1小时、3小时、6小时、12小时组NE均可诱导心肌细胞SP、CGRP表达水平较对照组显著升高（p＜0.05）,在10-8mol·L-1、6小时达高峰。（2）培养细胞上清液中加入NE(10-8mol·L-1),1小时、3小时、6小时均可诱导心肌细胞凋亡,较对照组显著（p＜0.05）,在1小时最为明显。（3）SP+NE组凋亡率明显低于NE10-8mol·L-1、1小时组（p＜0.05）。结论（1）培养细胞上清中加入去甲肾上腺素可诱导心肌细胞SP、CGRP表达水平的增高。（2）培养细胞上清中加入去甲肾上腺素可诱导心肌细胞凋亡。（3）SP预先干预可显著抑制去甲肾上腺素诱导的体外培养新生大鼠心肌细胞凋亡的发生,提示SP可能在细胞水平发挥心肌保护作用。