仙茅抗骨质疏松化学成分及品质评价研究

论文摘要

仙茅是石蒜科植物仙茅Curculigo orchioides Gaertn.的根茎,为我国传统中药,在近两版《中华人民共和国药典》中均有收录。具有补肾助阳、益精血、强筋骨和行血消肿的作用,主要用于肾阳不足、阳痿遗精、虚痨内伤和筋骨疼痛等病症。仙茅的主要化学成分有环菠萝蜜烷型三萜皂苷、酚及酚苷,木脂素及木脂素苷、黄酮等。药理活性研究显示仙茅属植物具有调节免疫、抗氧化、保肝、保护心血管系统、改善味觉、补肾壮阳及抗骨质疏松等作用。目前临床上很多防治骨质疏松的方剂中都含有仙茅,然而其活性物质基础尚不清楚。本课题在明确仙茅防治骨质疏松作用的基础上,对仙茅的化学成分进行了系统的分离和活性评价,明确了其中抗骨质疏松的物质基础。同时,采用HPLC-UV技术对不同来源的仙茅药材进行了品质评价。以去卵巢骨质疏松大鼠为模型,观察了仙茅乙醇提取物的抗骨质疏松作用,结果表明给服仙茅提取物的去卵巢大鼠的骨损失能够得到明显抑制,而且不会影响体重和子宫的变化。仙茅提取物能够明显地增加去卵巢大鼠的血清P、Ca和OPG水平,抑制血清DPD/Cr、ACTH水平和TRAP活性,但对血清TNF-α、IL-6水平和ALP活性作用不明显。因此,仙茅潜在的抗骨质疏松活性得以确认,主要表现为抑制去卵巢的骨吸收和匀?錚、Ca水平,但对促进骨形成不明显。但是,仙茅抗骨质疏松作用的具体机制和活性化学成分有待进一步的研究。利用常规色谱分离和制备高效液相色谱分离相结合,共从仙茅中分离得到7个单体化合物,应用现代波谱技术(UV,MS,IR,1H-NMR,13C-NMR,2D-NMR等)对其进行了结构鉴定。分离得到1个结构新颖的含氯酚类化合物和6个已知的化合物,它们分别为2,6-二甲氧基苯甲酸（1）、仙茅苷（2）、仙茅苷乙（3）、仙茅素A（4）、2,4-二氯-5-羟基-3-甲基苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-W-吡喃葡萄糖苷,命名为仙茅素D（5）、3,3′,5,5′-四甲氧基-7,9′:7′,9-二环氧木脂素-4,4′-二-O-β-D-葡萄糖苷（6）、β-谷甾醇（7）,其中仙茅素D为一含氯酚类新化合物。通过原代成骨细胞和诱导破骨细胞培养,对分离得到的酚及酚苷类化合物进行活性筛选,结果发现酚苷类化合物能够明显地促进成骨细胞增殖和抑制破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性,具有潜在的抗骨质疏松活性。采用HPLC-UV的方法对12个不同产地的仙茅样品进行指纹图谱研究,并对其仙茅苷和仙茅苷乙的含量进行测定,建立仙茅药材的质量评价方法。结果发现,不同产地的仙茅样品化学成分差异较大,而且仙茅苷和仙茅苷乙的含量也有很大差异。结果发现以云南峨山（CO-ES）样品的仙茅苷含量最高,为0.538%,文山（CO-WS）样品仙茅苷含量最低,为0.028%;云南宜良（CO-YL）样品仙茅苷乙含量最高,为0.330%,重庆巴南（CO-BN）样品仙茅苷乙含量含量最低,为0.103%。所分析样品的采集于范围在东经102.06～106.87、北纬23.15～30.11、海拔315～1850m的生境中,不同产地的仙茅样品化学成分差异较大可能与地理、气候,采集数量、时间,植物的生长年限等因素有关。对仙茅采集样品和商品药材的化学成分对比发现,采集样品和商品药材化学成分也有一定差异,说明药材加工贮存可能也会影响化学成分。研究发现仙茅苷和仙茅苷乙在采集样品中均为主要特征成分,仙茅苷和仙茅苷乙的同时测定更有利于仙茅质量的控制。建立多化学成分的质量控制指标对于衡量药材的品质至关重要,仙茅药材的道地性和加工方法等还许进一步的研究和开发。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 缩写词说明
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 仙茅的化学成分研究进展
• 1.2 仙茅的药理活性研究进展
• 1.3 骨质疏松症研究现状和进展
• 第二章 仙茅对去卵巢大鼠骨质疏松的作用
• 2.1 材料、试剂和仪器
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.4 小结和讨论
• 第三章 仙茅化学成分的分离鉴定和抗骨质疏松活性物质的筛选
• 3.1 仙茅化学成分的提取分离和结构鉴定
• 3.2 仙茅石油醚萃取物GC/MS分析
• 3.3 仙茅单体化合物对新生大鼠颅盖骨成骨细胞的作用
• 3.4 仙茅单体化合物对原代培养的破骨细胞的作用
• 3.5 小结和讨论
• 第四章 仙茅药材品质评价的研究
• 4.1 不同地区产仙茅HPLC化学指纹图谱的研究
• 4.2 不同产地产仙茅药材中仙茅苷和仙茅苷乙含量测定
• 4.3 小结与讨论
• 第五章 研究总结
• 5.1 总结
• 5.2 讨论
• 5.3 创新点
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介