补肾益气方调节母胎界面吲哚胺2，3-二氧化酶对Th细胞因子的影响

论文题目: 补肾益气方调节母胎界面吲哚胺2，3-二氧化酶对Th细胞因子的影响

论文类型: 博士论文

论文专业: 妇产科学

作者: 李雪莲

导师: 归绥琪

关键词: 吲哚胺,二氧化酶,滋养细胞,绒毛组织,流产,补肾益气方,蜕膜淋巴细胞,细胞因子,吲哚胺,二氧化酶蜕膜巨噬细胞

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 自然流产是妇科常见病、多发病，影响妇女的身心健康，其病因复杂，复旦大学妇产科医院根据中医“肾主生殖”的理论，利用补肾益气方治疗因母胎内分泌-免疫网络紊乱所致的流产，具有良好的临床保胎效果，前期临床研究和动物实验研究表明补肾益气方能调控母胎内分泌—免疫网络紊乱，使母胎界面Th1／Th2细胞因子的平衡偏向Th2型，提高母胎免疫耐受，有利于妊娠维持。胎盘作为妊娠期特有的内分泌和免疫器官，在妊娠维持中有重要作用，但补肾益气方如何影响胎盘的内分泌和免疫功能，尤其是如何影响母胎界面Th1／Th2细胞因子平衡值得深入研究。 吲哚胺2，3-二氧化酶(indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO)是一种含铁血红素单体蛋白，主要由胎盘滋养细胞和外周血单核／巨噬细胞分泌，通过代谢色氨酸、生成犬尿氨酸而调节免疫功能，一旦胚胎着床并开始与母体血液供应建立连接，胎盘部位的胎儿来源细胞便开始产生IDO。1-甲基色氨酸(1-methyl tryptophan，1-MT)是IDO活性的抑制剂，临床上，1-MT可导致补体活化、炎症及胎儿丢失，这可能与IDO通过降解色氨酸生成犬尿氨酸而抑制T细胞活性有关，IDO在调节孕期母体免疫中可能有重要作用，因此本实验拟研究正常早孕与难免流产绒毛组织和蜕膜组织IDO表达的差异，以探讨IDO与早孕流产的关系，并用血清药理学方法研究补肾益气方调节母胎界面绒毛滋养细胞、蜕膜巨噬细胞IDO的表达与活性对局部Th细胞因子的影响，以进一步探讨补肾益气方保胎的作用机制。 第一部分 人早孕绒毛及滋养细胞吲哚胺2，3-二氧化酶表达与流产的关系 目的：探讨人早孕绒毛组织吲哚胺2，3-二氧化酶(IDO)的表达与流产的关系以及IDO的表达细胞。 方法：用RT-PCR方法检测正常早期妊娠组和早孕难免流产组绒毛组织及JAR细胞株IDOmRNA表达；免疫组化方法分析两组绒毛组织IDO蛋白质表达情况；Western blot方法检测体外培养的人早孕绒毛滋养细胞是否有IDO蛋白质表达；高效液相色谱法检测人早孕绒毛滋养细胞是否存在IDO活性。 结果：难免流产组绒毛组织IDOmRNA及蛋白质表达均低于正常妊娠组；JAR细胞株不表达IDOmRNA；体外培养的人早孕绒毛滋养细胞表达IDO蛋白质；滋养细胞培养上清液中有犬尿氨酸生成，表明有IDO活性。 结论：绒毛组织IDO正常表达是维持妊娠所必需；滋养细胞有IDO表达与活性。 第二部分 补肾益气方调节滋养细胞吲哚胺2，3-二氧化酶表达和活性对母胎界面Th细胞因子的影响 目的：探讨补肾益气方调节离体培养的人早孕绒毛滋养细胞吲哚胺2，3-二氧化酶(IDO)mRNA和蛋白质表达及活性对母胎界面Th细胞因子的影响。 方法：分离人早孕绒毛滋养细胞，分六组分别培养24、48、72小时： 1 组加10％对照血清、不加IDO抑制剂； 2 组加10％对照血清、加抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT)500μmol／L； 3 组加10％对照血清、加1-MT1000μmol／L； 4 组加10％中药血清、不加抑制剂； 5 组加10％中药血清、加1-MT500μmol／L； 6 组加10％中药血清、加1-MT1000μmol／L。 用RT-PCR方法检测各组细胞IDOmRNA表达情况，用Western blot方法检测各组细胞IDO蛋白质表达。分别分离人早孕绒毛滋养细胞和蜕膜淋巴细胞后，将两种细胞体外共培养，分组同上，用ELISA方法检测共培养上清液中IL-10、IFN-γ含量，用高效液相色谱法检测细胞培养上清液中色氨酸、犬尿氨酸含量，以二者比值表示IDO活性。 结果：滋养细胞IDOmRNA及蛋白质的表达量与培养时间有关，体外培养72小时内的IDOmRNA及蛋白质表达量随培养时间的延长而增加；1-甲基色氨酸抑制IDO活性，使Th细胞因子平衡偏离Th2型；补肾益气中药血清可提高体外培养的滋养细胞IDOmRNA、蛋白质表达及活性，使Th细胞因子平衡偏向Th2型。 结论：补肾益气方可提高滋养细胞IDOmRNA、蛋白质表达及活性，恢复Th细胞因子平衡，调节母胎免疫。 第三部分 补肾益气方调节蜕膜巨噬细胞吲哚胺2，3-二氧化酶的表达和活性对母胎界面Th细胞因子的影响 目的：研究早孕蜕膜组织IDO表达与流产的关系，并探讨补肾益气方对人早孕蜕膜巨噬细胞IDO表达和活性以及母胎界面Th细胞因子的影响。 方法：RT-PCR方法检测人正常早期妊娠组和早孕难免流产组蜕膜IDOmRNA表达情况；分离人正常早孕蜕膜巨噬细胞，分为六组分别体外培养24、48、72小时： 1 组加10％对照血清、不加IDO抑制剂； 2 组加10％对照血清、加抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT)500μmol／L； 3 组加10％对照血清、加1-MT1000μmol／L； 4 组加10％中药血清、不加抑制剂； 5 组加10％中药血清、加1-MT500μmol／L； 6 组加10％中药血清、加1-MT1000μmol／L。 Western blot方法检测各组蜕膜巨噬细胞IDO蛋白质表达情况。分别分离蜕膜巨噬细胞和淋巴细胞后，进行体外共培养，分组同上，ELISA方法检测共培养上清液中IL-10、IFN-γ含量，高效液相色谱法检测细胞培养上清液中色氨酸、犬尿氨酸含量，以二者比值表示IDO活性。 结果：正常妊娠组蜕膜IDOmRNA表达高于难免流产组；IDO抑制剂1-MT使Th细胞因子平衡偏离Th2型；补肾益气中药血清可提高IDO蛋白质表达及活性，恢复Th细胞因子平衡。 结论：蜕膜巨噬细胞IDO正常表达和活性是维持妊娠所必需；补肾益气方可提高IDO活性至正常水平，调节母胎免疫耐受，有利于妊娠维持。

论文目录:

中文文摘

英文文摘

第一部分 人早孕绒毛及滋养细胞吲哚胺2,3-二氧化酶表达与流产的关系

前言

材料与方法

结果

讨论

第二部分 补肾益气方调节滋养细胞吲哚胺2,3-二氧化酶表达和活性对母胎界面Th细胞因子的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

第三部分 补肾益气方调节蜕膜巨噬细胞吲哚胺2,3-二氧化酶的表达和活性对母胎界面Th细胞因子的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

论文小结

论文创新性

展望

参考文献

研究生阶段发表及待发表的文章

致谢

附:已发表的综述

附:已发表的论文

发布时间: 2007-06-27

参考文献

• [1].补肾益气方对正常早孕期人滋养层细胞生长与凋亡特性的调节[D]. 王海燕.复旦大学2004
• [2].COPD伴AHR大鼠神经内分泌免疫网络若干指标变化及补肾益气药对其调节作用的研究[D]. 崔焱.复旦大学2007

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