NO-1886改善糖尿病巴马猪糖脂代谢的病理机制研究

论文摘要

目的:观察高脂/高糖/高胆固醇饲料能否引起广西巴马小型猪发生糖脂代谢紊乱,从而发展为2型糖尿病;观察NO-1886能否改善糖脂代谢紊乱,保护胰岛β细胞;观察NO-1886对胰岛β细胞凋亡的影响及其对细胞凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达的影响,从而阐明这一新的药物对胰腺β细胞凋亡的影响和β细胞凋亡在2型糖尿病的发病机制中的作用。 方法:1) 动物及喂养:广西巴马猪随机分为对照组、高脂/高糖/高胆固醇喂养组、高脂/高糖/高胆固醇喂养+NO-1886治疗组;分别用正常饲料、高脂/高蔗糖/高胆固醇饲料、高脂/高蔗糖/高胆固醇饲料补充1.0%NO-1886喂养5个月。2)血糖、血脂代谢研究等:每个月末取动物空腹血,测定血糖、胰岛素、胰高血糖素、TG、TC、Amylin、FFA、HDL-C。每个月末作一次口服葡萄糖耐量试验。3) 用光镜、电镜、胰岛素免疫组化染色、刚果红染色、Amylin免疫组化、Hoechest荧光染色观察胰岛细胞凋亡;胰岛素免疫组化+细胞凋亡原位检测（TUNEL）标记β细胞凋亡计数。4) 用免疫组化和Western blot技术检测bcl-2、bax在胰岛的表达。 结果:用高脂/高蔗糖/高胆固醇饲料喂养可诱导广西巴马猪发生糖代谢的紊乱,具有2型糖尿病的特征,引起空腹葡萄糖、胰岛素、胰高血糖素、TG、TC、FFA、Amylin水平增高,HDL-C水平降低以及胰岛素抵抗和胰岛β细胞损害,胰岛内有IAPP的沉积,胰岛bcl-2蛋白表达下调、bax蛋白表达上调。在高脂高蔗糖高胆固醇饲料中添加1%NO-1886后,巴马猪空腹血糖、胰岛素、胰高血糖素、TG、TC、FFA、Amylin浓度均无明显升高,HDL-C水平增高,胰岛内IAPP沉积减少,血浆葡萄糖清除率以及胰岛素分泌急性相都有了明显改善,胰岛β细胞的结构和功能受到保护。胰岛bcl-2蛋白表达上调、bax蛋白表达下调。

论文目录

• 主要缩写词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料和方法
• 一 材料
• （一） 药物
• （二） 饲料及试剂
• （三） 主要仪器
• 二 动物模型的建立
• （一） 动物实验
• （二） 血糖、胰岛素、胰高血糖素、血脂、Amylin等检测
• （三） 脂蛋白脂酶活性检测
• （四） 口服葡萄糖耐量试验（OGTT）
• （五） 胰岛素敏感性试验
• 三 胰岛细胞凋亡的检测
• （一） 胰腺组织病理学检查
• （二） 胰岛细胞超微结构观察
• （三） 胰岛β细胞免疫染色及分析
• （四） 胰腺组织Hoechest荧光染色
• （五） β细胞凋亡计数
• （六） 胰腺组织刚果红染色
• （七） 胰腺组织Amylin免疫染色
• （八） 胰岛bcl-2、bax免疫染色及分析
• （九） Western blot印迹检测胰岛bcl-2、bax蛋白表达
• 四 统计学分析
• 结果
• 一 NO-1886对血浆葡萄糖、胰岛素、胰高血糖素、TG、FFA、TC、Amyline和LPL的影响
• （一） NO-1886对血浆葡萄糖的影响
• （二） NO-1886对空腹血清胰岛素的影响
• （三） NO-1886对空腹血清胰高血糖素的影响
• （四） NO-1886对血浆TG的影响
• （五） NO-1886对血浆FFA的影响
• （六） NO-1886对血浆TC的影响
• （七） NO-1886对空腹血清Amylin的影响
• （八） NO-1886对空腹血清HDL-C的影响
• （九） NO-1886对空腹、餐后血清LPL的影响
• 二 糖耐量试验
• 三 胰岛素敏感性试验
• 四 NO-1886对胰腺组织结构的影响
• 五 NO-1886对胰岛超微结构的影响
• 六 NO-1886对胰岛β细胞结构和功能的影响
• 七 胰腺组织Hoechst荧光染色
• 八 β细胞凋亡计数
• 九 胰腺组织刚果红染色结果
• 十 胰腺组织Amylin免疫染色结果
• 十一 免疫组化检测胰腺bcl-2、bax蛋白
• 十二 Western blot检测胰岛bcl-2、bax蛋白
• 讨论
• 结论
• 主要参考文献
• 综述 细胞凋亡与2型糖尿病
• 攻读硕士期间发表的论文
• 致谢