福美双对体外培养的肉鸡胫骨生长板软骨细胞生化指标的影响及Matrilin-3的基因表达变化研究

论文摘要

胫骨软骨发育不良是广泛发生在禽类养殖业中的一种软骨代谢性疾病,本病常发于幼龄肉鸡、蛋鸡和火鸡等禽类。临床表现为精神沉郁,食欲减退,经常匍匐于地面,运动障碍,站立困难,严重时会以双翅支撑行走。病理表现为骺端生长板软骨增厚,严重时能形成玉白色、不能钙化、无血管的楔形软骨并插入骨髓。胫骨软骨发育不良可导致鸡的抗病性能和生产性能降低,诱发胸部囊肿和骨髓炎,降低鸡肉的品质和等级,给肉鸡业造成重大经济损失。本试验是在福美双成功诱发肉鸡胫骨软骨发育不良的基础上,采用体外细胞培养的方法研究福美双对胫骨软骨细胞生长发育相关的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和一氧化氮合成酶和骨化相关基因Matrilin-3表达水平的影响。细胞培养液中福美双的浓度分别为0.1、1、3、5μmol,另外设对照组,作用时间72h。结果表明,与对照组相比,碱性磷酸酶和一氧化氮合成酶的活性随着福美双浓度的升高而增加,酸性磷酸酶的活性随着福美双浓度的升高而无规律性,半定量RT-PCR检测结果显示,Matrilin-3基因表达随着福美双浓度的升高而表达下调。福美双影响胫骨软骨细胞生长发育相关酶的活性和降低骨化相关基因Matrilin-3表达水平,是福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良的机理。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩写词汇表（Abbreviation）
• 文献综述
• 1.胫骨软骨发育不良
• 2.长骨的结构、生长及发育过程
• 2.1.长骨的结构
• 2.2.骨的生长及发育
• 2.2.1 软骨雏形形成
• 2.2.2 软骨周骨化
• 2.2.3 软骨内骨化
• 3.肉鸡胫骨软骨发育不良的特征
• 4.胫骨软骨发育不良发生的原因
• 4.1.性别
• 4.2.遗传选育与生长速度
• 4.3.细菌及病毒性疾病
• 4.4.营养因素
• 4.4.1.钙和磷
• 4.4.2.铜、锌和锰
• 4.4.3.日粮阴阳离子平衡
• 4.4.4.VA、VD、VC及其代谢产物
• 4.4.5.含硫氨基酸和生物素水平
• 4.4.6.二硫代氨基甲酸盐类
• 5.胫骨软骨发育不良的发病机理
• 5.1.酶的变化
• 5.2.细胞外基质变化
• 5.3.血管因素
• 5.4.生长因子和细胞因子
• 5.4.1 转录生长因子-β
• 5.4.2.甲状旁腺激素、甲状旁腺激素相关肽及其受体和Indian Hedgehog
• 5.4.3.成纤维细胞生长因子及其受体
• 5.4.4.维生素D的代谢
• 5.4.5.C-Myc蛋白
• 5.4.6.基质金属蛋白酶和血管内皮生长因子
• 5.4.7.基因表达
• 6.预防胫骨软骨发育不良的措施
• 材料与方法
• 1.试验动物
• 2.主要试剂及配制方法
• 2.1.试验试剂
• 2.2.主要试剂的配制方法
• 3.主要仪器设备
• 4.细胞培养
• 5.AKP、ACP和NOS的活性测定
• 6.RNA提取
• 7.引物序列
• 8.反转录
• 9.Matrilin-3基因半定量RT-PCR测定
• 10.数据处理
• 结果
• 1.细胞培养
• 2.软骨细胞鉴定
• 3.AKP、ACP和NOS测定结果
• 3.1.AKP、ACP和NOS测定值
• 3.2.AKP、ACP和NOS活性变化
• 4.半定量凝胶电泳结果
• 5.Matrilin-3/β-actin光密度比值
• 讨论
• 1.肉鸡生长板软骨细胞培养
• 2.软骨细胞鉴定
• 3.与骨骼发育相关的生化指标分析
• 3.1.NO的发现和组成
• 3.2.NO的生理作用
• 3.3.AKP、ACP和NOS测定结果分析
• 4.Matrilin-3与肉鸡TD
• 结论
• 参考文献
• 致谢