小陷胸汤加味方干预动脉粥样硬化炎性机制的理论探讨和实验研究

论文摘要

目的:应用小陷胸汤加味方干预动脉粥样硬化炎性机制,探讨动脉粥样硬化模型大鼠“痰瘀”的病理变化。通过观察小陷胸汤加味方对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）大鼠模型血管内皮的保护作用、主动脉内膜形态学的影响、血脂和血液流变学及炎性因子的作用,初步阐明中医痰热瘀毒之邪与炎性因子及调控机制之间的的相关性,证明小陷胸汤加味方对于动脉粥样硬化炎性机制的干预作用。方法:理论探讨:在广泛收集整理历代医家有关论述与现代关于AS文献的基础上,依据清热祛痰化瘀通络法探讨AS中医病机,指出痰脂阻络是AS的发病基础,痰瘀热毒互结、脉道不畅是AS的主要病理环节,痰瘀化热是AS的主要病理改变。确立“清热祛痰、化瘀通络”的治法,并据此制定小陷胸汤加味方剂。实验研究:健康雄性SD大鼠采用高脂饮食并一次性腹腔注射维生素D3的方法建立AS大鼠模型。将雄性SD大鼠随即分为空白对照组,模型组,辛伐他汀组,小陷胸汤加味方剂量组。空白对照组给予普通饲料,其它各组均给予高脂饲料喂养。辛伐他汀组和小陷胸汤加味方组在高脂饮食基础上分别灌胃给予辛伐他汀和小陷胸汤加味方,空白对照组和模型组给予等体积溶媒,各组连续灌胃给药8周。于8周末检测大鼠血清中总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三脂（triglyceride ,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol ,HDL-C）含量;血液流变学各项含量;应用光镜观察主动脉内膜形态学的变化;透射电镜观察主动脉内皮细胞超微结构的改变;免疫比浊法测量高敏C反应蛋白（high-sensitive C reactive protein,hs-CRP）、免疫组织化学染色观察细胞间黏附分子-1（inter-cell adhesion molecule-1,ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）指标的改变;并采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测8周末主动脉匀浆中ICAM-1、VCAM-1 mRNA的表达。结果:1小陷胸汤加味方对AS大鼠的血脂、血流变及主动脉内膜形态学的影响与空白对照组相比较,模型组TC、TG、LDL-C均明显升高（P<0.05）,HDL-C明显降低（P<0.05）;与模型组相比较,小陷胸汤加味方剂量组的总胆固醇（TC）,甘油三脂（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,显著降低（P<0.01）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）无显著变化（P>0.05）。与模型组相比较,辛伐他汀组的总胆固醇（TC）,甘油三脂（TG）,,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,均有不同程度地降低（P<0.01）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）无显著变化（P>0.05）。小陷胸汤加味方和辛伐他汀组相比较无显著差异（P>0.05）。与空白对照组相比较,模型组的血液流变学各项均明显升高（P<0.01）;与模型组相比较,辛伐他汀组血液流变学各项无显著差异（P>0.05）;与模型组相比较,小陷胸汤加味方组血液流变学各项水平显著降低（P<0.01）。HE染色结果显示:模型组:8周末主动脉内膜可见成熟的斑块,斑块主要由泡沫细胞、纤维母细胞、平滑肌细胞、胶原纤维及炎性细胞等构成,斑块内纤维组织明显增生,少数已经在其表面形成纤维层。辛伐他汀组:8周末主动脉内膜增厚,单位面积下内皮细胞增多,内皮下泡沫细胞增生,斑块较模型组减小,炎性细胞浸润减少,病变较模型组减轻。小陷胸汤加味方组:8周末主动脉内膜斑块较模型组明显减小,甚至消失,泡沫细胞数量显著减少,偶见炎性细胞浸润,内皮增生、略肿胀,病变较模型组明显减轻。电镜结果显示:模型组:8周末主动脉内皮细胞明显肿胀,粗面内质网严重脱颗粒,线粒体数量减少,嵴减少、融合、甚至消失,吞饮小泡数量明显减少。辛伐他汀组:8周末主动脉内皮细胞粗面内质网轻度扩张、不整形,有脱颗粒现象,线粒体嵴减少,吞饮小泡数量减少。与模型组相比较,病变减轻。小陷胸汤加味方组:8周末主动脉内皮细胞内质网明显扩张呈池状,有轻微脱颗粒现象,线粒体嵴较多、部分融合消失。与模型组相比较,病变明显减轻。2小陷胸汤加味方对AS大鼠心脏主动脉内皮细胞炎性因子ICAM-1、VCAM-1、hs-CRP表达的影响:与空白对照组相比较,模型组主动脉内皮细胞hs-CRP阳性表达强度显著增加,ICAM-1和VCAM-1阳性表达的强度和范围亦增强（P<0.01）;辛伐他汀组、小陷胸汤加味方组与同时间模型组比较,hs-CRP、ICAM-1、VCAM-1阳性表达显著减少（P<0.05, P<0.01）;小陷胸汤加味方组ICAM-1、VCAM-1、hs-CRP的阳性表达较辛伐他汀组减少（P<0.01）。3小陷胸汤加味方对AS大鼠心脏主动脉内皮细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达的影响:与空白对照组比较,模型组ICAM-1、VCAM-1 mRNA转录水平显著升高（P<0.01）;与模型组相比较,辛伐他汀组、小陷胸汤加味方组ICAM-1及VCAM-1 mRNA显著降低（P<0.05, P<0.01）;小陷胸汤加味方组ICAM-1及VCAM-1 mRNA水平显著低于辛伐他汀组（P<0.01）。结论:1本课题根据动脉粥样硬化是炎性病变探讨中医的病机和治疗,指出痰脂阻络是动脉粥样硬化的中医的病理基础,通过实验证实动脉粥样硬化（AS）是由于痰凝日久,终致脉道不利,气机不畅,血脉瘀阻而成脉痹。其痰瘀热毒的病理基础与动脉粥样硬化（AS）的炎性机制及调控机制具有内在相关性。确立“清热祛痰、化瘀通络”的治法并据此制定小陷胸汤加味方剂,具有理论创新性。2研究表明,小陷胸汤加味方能改善主动脉内膜形态学和内皮细胞的超微结构的病理改变,对血管内皮具有保护作用;还能降低高脂损伤大鼠的总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,降低血液流变学各指标的作用,具有降脂,改善血液黏度的作用;同时小陷胸汤加味方还能够降低血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA的转录水平,进而减少血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白的表达,还能抑制炎性因子高敏C反应蛋白（hs-CRP）的表达,发挥其抗炎的作用。综上实验,我们初步证明了降脂,抗血小板聚集,抗炎,抑制炎性因子基因及蛋白的表达是小陷胸汤加味方干预动脉粥样硬化的作用机制,说明小陷胸汤加味方在抑制血管内皮炎性因子的表达和改善血脂、血流变的同时可以修复由其引发的血管的继发性病理改变,阻止或延缓了冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）的进程,说明了小陷胸汤加味方干预动脉粥样硬化是通过改善血管炎症病变而起作用的。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 小陷胸汤加味方干预动脉粥样硬化炎性机制的理论探讨和实验研究
• 第一部分 小陷胸汤加味方干预动脉粥样硬化炎性机制的理论探讨
• 参考文献
• 第二部分 小陷胸汤加味方干预动脉粥样硬化炎性机制的实验研究
• 前言
• 实验一 小陷胸汤加味方对动脉粥样硬化大鼠血脂、血液流变学及动脉内膜形态学的影响
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 实验二 小陷胸汤加味方对动脉粥样硬化大鼠内膜炎性因子VCAM-1、ICAM-1 和hs-CRP 表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 实验三 小陷胸汤加味方对动脉粥样硬化大鼠内皮细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA 表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述一 炎症与动脉粥样硬化的研究
• 综述二 中药治疗动脉粥样硬化的实验研究进展
• 致谢
• 个人简历