全反式维甲酸联合放射线照射对食管癌细胞周期、凋亡及NF-κB、β-catenin、CyclinD1表达的影响

论文摘要

目的:我国是食管癌高发国,其死亡率居恶性肿瘤的第四位,严重影响了人类的生命和健康。由于大多数食管癌发病隐匿,多数患者就诊时己属中晚期,失去了手术的时机,因此寻找更为合理有效的治疗方法成为食管癌治疗领域研究的热点。化学药物治疗在食管癌的综合治疗中占有越来越重要的地位。全反式维甲酸（ATRA）是迄今为止研究最为深入、作用最强的化疗药物之一,但单独应用ATRA毒副作用大,易产生继发性耐药。应用放化疗联合,可以减少化疗药物的剂量,减轻其副作用,达到协同增效的结果,因此探索ATRA与放射线联合应用是肿瘤研究的一个重要方向。本研究选择食管癌细胞Eca109作为研究对象,通过检测ATRA联合放射线照射对食管癌细胞周期、凋亡的影响及NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表达的调节,试图为食管癌的临床治疗提供理论依据。方法:1 MTT比色法检测不同浓度ATRA作用24小时、48小时、72小时后对食管癌细胞Eca109生长抑制率的影响。选取ATRA作用48小时后抑制率约为25%、50%的药物浓度作为流式细胞术及细胞免疫化学的检测浓度。2应用流式细胞术检测Eca109细胞周期及凋亡率。实验分为:对照组:不做任何处理;ATRA处理组:终浓度分别为0.78μmol/L、5μmol/L的ATRA;60Coγ放射线照射组:6Gy单次照射;ATRA联合60Coγ射线处理组:6Gy单次照射后分别加入0.78μmol/L、5μmol/L的ATRA。以上各组分别作用24小时、48小时后上机检测。3采用免疫细胞化学法检测5μmol/L ATRA处理48h前后Eca109细胞NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白的表达情况。4应用流式细胞术检测各组Eca109细胞NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表达。实验分组方法同2。5实验数据经统计软件SPSS11.5处理,采用单因素方差分析、两样本的t检验、直线相关分析,以α=0.05为差异显著性标准。结果:1 MTT比色法检测结果显示:随ATRA浓度的增加,Eca109细胞生长抑制率上升。各浓度组和对照组相比,有显著性差异（ P<0.05）。2 Eca109细胞在浓度为0.78μmol/L的ATRA作用24小时后,G0/G1期细胞比例由35.40±1.57%增至40.47±1.96%,当ATRA浓度增加为5μmol/L时,G0/G1期细胞比例增至46.13±0.68%,两组相比有显著性差异（P<0.05）;6Gy放射线照射后24小时,G0/G1期细胞比例为38.73±1.33%; 0.78μmol/L的ATRA与放射线联合作用后24小时,G0/G1期细胞比例增至48.13±0.90%,5μmol/L的ATRA与放射线联合作用,G0/G1期细胞比例增至51.30±1.04%,两组相比有显著性差异（P<0.05）;ATRA联合放射线作用组与各单独作用组相比有显著性差异（P<0.05）;各作用组与对照组相比有显著性差异（P<0.05）。ATRA、放射线及两者联合分别作用48小时,Eca109细胞周期时相变化的分析结果与作用24小时的分析结果一致。3 Eca109细胞在浓度为0.78μmol/L的ATRA作用24小时后,凋亡率由1.68±0.16%增至3.41±0.26%,当ATRA浓度增加为5μmol/L时,凋亡率为5.03±0.23%,两组相比有显著性差异（P<0.05）;6Gy放射线照射后24小时,凋亡率增至2.69±0.16%;0.78μmol/L的ATRA与放射线联合作用后24小时,凋亡率为8.00±0.48%,5μmol/L的ATRA与放射线联合作用,凋亡率增至11.44±0.51%,两组相比有显著性差异（P<0.05）;ATRA联合放射线作用组与各单独作用组相比有显著性差异（P<0.05）;各作用组与对照组相比有显著性差异（P<0.05）。ATRA、放射线及两者联合分别作用48小时,Eca109细胞凋亡的变化的分析结果与作用24小时的分析结果一致。4浓度为5μmol/L的ATRA的作用48小时后,Eca109细胞NF-κB、β-catenin、CyclinD1阳性细胞表达率均降低,显著低于对照组（P<0.05）。5 ATRA作用Eca109细胞24小时、48小时后,NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表达降低,且随着药物浓度的增加其蛋白表达降低显著（P<0.05）;放射线单独作用24小时、48小时其蛋白表达降低较少;ATRA联合放射线作用组与各单独作用组相比有显著性差异（P<0.05）,且随着药物浓度的增加其蛋白表达降低显著（P<0.05）;各作用组与对照组相比有显著性差异（P<0.05）。NF-κB、CyclinD1蛋白表达呈正相关（P<0.05）,β-catenin、CyclinD1蛋白表达呈正相关（P<0.05）,NF-κB、β-catenin蛋白表达呈正相关（P<0.05）。结论:1 ATRA对Eca109细胞的生长抑制具有浓度依赖效应关系,随着浓度的增加细胞生长抑制率上升。2 ATRA联合放射线照射能更有效地阻止Eca109细胞由G0/G1期向S期转化、诱导Eca109细胞凋亡,且随着药物浓度增加,作用更加明显。3 ATRA联合放射线照射能协同抑制Eca109细胞NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表达,有浓度依赖效应关系;并且NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表达水平呈两两正相关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 全反式维甲酸联合放射线照射对食管癌细胞周期、凋亡及NF-κB、β-catenin、CyclinD1 表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 NF-κB、β-catenin 与肿瘤发生的研究进展
• 致谢
• 个人简历