毛冬瓜化学成分及其抗肿瘤活性研究

论文摘要

毛冬瓜（.Actinidia eriantha Benth.）为猕猴桃科猕猴桃属植物,分布于浙江,广西等地；其根全年可采集,其叶夏秋采集。《中药大辞典》记载其有治疗胃癌、鼻咽癌、乳癌等功能。目前关于其化学成分的研究报导主要以三萜类和多糖类为主,药理活性研究以抗肿瘤和免疫调节为主。本论文对毛冬瓜化学成分及其抗肿瘤活性进行了初步系统研究,样品（主要是已晒干并做成切片的根茎）于2008年10月从浙江遂昌采集,并由浙江中医药大学陈锡林副教授鉴定。1 kg毛冬瓜样品粉粹后以80%甲醇做溶媒利用微波辅助法进行提取。浓缩回收甲醇后,依次用氯仿（Chlo）,乙酸乙酯（EtOAc）,水饱和正丁醇（n-BuOH）对总提液（MeOH）进行系统溶剂萃取。浓缩回收各部位溶剂,冻干得到以上三种提取物,得率分别是0.13%,0.07%,0.58%。通过MTT法对各部位提取物进行体外抗肿瘤活性初步筛选,确定活性部位及敏感癌细胞株。所使用的癌细胞株分别是肝癌细胞株SMMC-7721,肺癌细胞株A549,乳腺癌细胞株MDA-MB-453,结肠癌细胞株HT-29和食管癌细胞株TE-1。正常肝细胞株L-02做细胞阳性对照,阳性对照药物为阿霉素。结果显示,毛冬瓜提取物抗癌活性从大到小依次是氯仿层（Chlo）、乙酸乙酯层（EtOAc）、水饱和正丁醇层（n-BuOH）。各肿瘤细胞株对氯仿层的敏感性顺序从大到小为：SMMC-7721> TE-1> HT-29> MDA-MB-453> A549;对乙酸乙酯层的敏感性顺序从大到小为：HT-29> SMMC-7721> A549> MDA-MB-453>TE-1;对水饱和正丁醇层的敏感性顺序从大到小为：MDA-MB-453> HT-29>TE-1>SMMC-7721>A549;对毛冬瓜总提物的敏感性顺序从大到小为：SMMC-7721>HT-29>MDA-MB-453>A549>TE-1。其中,氯仿层对SMMC-7721、HT-29、 TE-1和MDA-MB-453作用72h后的IC50分别是221.82μg·mL-1、303.39μg·mL-1 224.39μg·mL-1和315.50μg·mL-1;乙酸乙酯层对SMMC-7721、HT-29作用72h后的IC50分别是563.6μg·mL-1、483.06μg·mL-1。在对抗癌活性最高的氯仿层进行的研究中,通过硅胶薄层层析和显色反应确定了其抗癌成分为生物碱类物质,通过硅胶柱层析共收集到15个组分。选取其中的2号样品用分析型HPLC初步摸索了分离条件,结果发现乙腈浓度为85%、保留时间在8.5-10min时出峰,但未完全分离。利用显色反应初步确定了乙酸乙酯层与水饱和正丁醇层主要为黄酮类物质。以上工作为毛冬瓜抗癌单体化合物的进一步分离提供了实验依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 癌症概述
• 2 抗癌天然药物概述
• 2.1 天然药物的抗癌作用机制
• 2.2 抗癌天然药物化学分类及其代表物质
• 3 研究内容与目的意义
• 3.1 毛冬瓜及其研究现状
• 3.2 研究内容与目的意义
• 第二章 毛冬瓜甲醇微波辅助法及系统溶剂法萃取
• 1 前言
• 2 材料试剂,仪器和方法
• 2.1 材料试剂
• 2.2 仪器
• 2.3 毛冬瓜微波辅助法提取工艺
• 2.4 毛冬瓜总提物有机溶剂萃取
• 3 结果
• 3.1 单因素考察分析
• 3.2 正交试验分析
• 3.3 有机溶剂萃取法得率
• 4 讨论
• 4.1 微波辅助提取法提取毛冬瓜有效成分
• 4.2 系统溶剂法萃取毛冬瓜总提物
• 第三章 毛冬瓜总提物及各提取部位抑制肿瘤细胞增殖活性的体外研究
• 1 前言
• 2 材料试剂,仪器和方法
• 2.1 材料、试剂和仪器
• 2.2 实验方法
• 3 结果
• 3.1 阳性对照阿霉素对五种癌细胞株和正常肝细胞株L-02的作用
• 3.2 毛冬瓜总提物及各提取部位对五种癌细胞株和正常肝细胞株L-02的作用
• 3.3 各提取部位体外抗肿瘤作用的比较
• 4 讨论
• 4.1 MTT实验方法
• 4.2 体外抗肿瘤活性实验
• 第四章 毛冬瓜各提取部位的化学成分研究
• 1 前言
• 2 材料试剂,仪器和方法
• 2.1 材料试剂
• 2.2 仪器
• 2.3 毛冬瓜氯仿提取物化学成分研究
• 2.4 毛冬瓜乙酸乙酯提取物显色反应
• 2.5 毛冬瓜水饱和正丁醇提取物显色反应
• 3 结果
• 3.1 毛冬瓜氯仿提取物的化学成分研究
• 3.1.1 毛冬瓜氯仿提取物硅胶薄层层析
• 3.1.2 毛冬瓜氯仿提取物显色反应
• 3.1.3 毛冬瓜氯仿提取物硅胶柱层析
• 3.1.4 高效液相色谱法分离毛冬瓜氯仿提取物的单体化合物
• 3.2 毛冬瓜乙酸乙酯提取物显色反应
• 3.3 毛冬瓜水饱和正丁醇提取物显色反应
• 4 讨论
• 4.1 毛冬瓜氯仿提取物的化学成分研究
• 4.1.1 毛冬瓜氯仿提取物的硅胶薄层层析行为
• 4.1.2 毛冬瓜氯仿提取物的显色反应
• 4.1.3 毛冬瓜氯仿提取物的硅胶柱层析行为
• 4.1.4 毛冬瓜氯仿提取物的高效液相色谱行为
• 4.2 毛冬瓜乙酸乙酯与水饱和正丁醇提取物的显色反应
• 第五章 结论与展望
• 参考文献
• 致谢