川芎嗪对大鼠胶原性关节炎血管生成与巨噬细胞分泌VEGF的影响

论文题目: 川芎嗪对大鼠胶原性关节炎血管生成与巨噬细胞分泌VEGF的影响

论文类型: 博士论文

论文专业: 药理学

作者: 陈刚

导师: 徐晓玉

关键词: 血管内皮生长因子,血管生成,微血管密度,胶原性关节炎,川芎嗪,巨噬细胞,缺氧诱导因子

文献来源: 重庆医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:通过观察川芎嗪对大鼠胶原性关节炎滑膜炎症发展,血管生成和血管内皮生长因子表达的影响,以及川芎嗪对大鼠腹腔巨噬细胞受脂多糖刺激后分泌血管内皮生长因子和表达缺氧诱导因子-1 的影响,探讨川芎嗪抗血管生成的机制。 方法: 1. 皮内注射Ⅱ型胶原诱导大鼠胶原性关节炎,给予 100mg/kg?d、50 mg/kg?d 川芎嗪灌胃,连续用药 30 天。以 10mg/kg?d 环孢霉素 A灌胃为阳性对照。检测关节炎指数积分和炎症足垫厚度,X 摄片检测关节结构,透射电镜观察滑膜毛细血管内皮细胞超微结构,免疫组化观察滑膜血管内皮生长因子的表达和滑膜微血管密度,RT-PCR 方法检测血管内皮生长因子 mRNA 的表达,Western Blot 方法检测血管内皮生长因子蛋白的表达。 2. 原代培养大鼠腹腔巨噬细胞,给予 10μg/ml 脂多糖刺激同时,分别加入剂量为 100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml 的川芎嗪共同培养,以加入 0.5μg/ml 地塞米松为阳性对照。ELISA 方法检测巨噬细胞培养上清液中血管内皮生长因子的含量,MTT 法检测药物对巨噬细胞增殖的影响,Western Blot 方法检测巨噬细胞中缺氧诱导因子-1α蛋白的表达。 结果: 1. 用药 30 天后,100mg/kg?d 川芎嗪组大鼠关节炎指数为 6.57±1.06,与模型组 7.42±1.59 相比显著降低(P<0.05);50 mg/kg?d

论文目录:

符号说明

中文摘要

英文摘要

绪言

第一部分 川芎嗪对大鼠胶原性关节炎滑膜血管生成与产生VEGF的影响

前言

实验材料

1. 主要试剂

2. 主要仪器

3. 实验动物

4. 主要试剂的配制

模型的建立

1. 造模方法

2. 模型评分标准

2.1 关节炎指数评分

2.2 足垫厚度测量

3. 实验动物纳入标准

4. 造模结果

实验方法

1. 模型分组

2. 给药

3. X摄片关节

4. CIA 大鼠滑膜组织的分离

5. 透射电镜观察血管内皮细胞

6. 免疫组织化学染色VEGF 及CD34

7. VEGF 表达及MVD 评定方法

8. Western Blot 检测滑膜VEGF 蛋白的表达

8.1 蛋白样品的制备

8.2. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

8.3 考马斯亮蓝对SDS-聚丙烯酰胺凝胶染色

8.4 蛋白质从SDS-聚丙烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素膜

8.5 免疫检测VEGF 蛋白

9. RT-PCR 检测滑膜VEGFmRNA 的表达

9.1 总RNA 的提取

9.2. RNA 的鉴定和定量

9.3. RT-PCR 反应

9.3.1 引物

9.3.2 逆转录反应

9.3.3. PCR 产物检测

10. 统计学分析

实验结果

1. TMP 对大鼠关节炎指数的影响

2. TMP 对CIA 大鼠足垫厚度的影响

3. TMP 对CIA 大鼠关节结构的影响

4. 电镜观察TMP 对CIA 大鼠滑膜血管内皮细胞超微结构的影响

5. 免疫组化分析TMP 对CIA 大鼠滑膜表达VEGF 和MVD 的影响

6. Western Blot 分析TMP 对CIA 大鼠滑膜分泌VEGF 的影响

7. RT-PCR 分析TMP 对CIA 大鼠滑膜表达VEGFmRNA 的影响

小结

第二部分 川芎嗪对大鼠巨噬细胞分泌VEGF 的影响及其机制

前言

实验材料

1. 主要试剂

2. 主要仪器

3. 实验动物

4. 主要试剂的配制

实验方法

1. 大鼠腹腔巨噬细胞的原代培养

1.1 大鼠腹腔巨噬细胞的获得

1.2 大鼠腹腔巨噬细胞的形态观察

2. ELISA 方法检测巨噬细胞培养液中VEGF 的含量

2.1 巨噬细胞的准备及分组用药

2.2.E LISA 检测巨噬细胞培养液中VEGF 的含量

3. MTT 法检测TMP 对巨噬细胞生长的影响

4. Western Blot 检测TMP 对LPS 刺激后巨噬细胞表达HIF-1 的影响

4.1 巨噬细胞的准备及分组用药

4.2 蛋白样品的制备

4.3. Western Blot 的其它步骤参照第一部分实验的8.2~8.5

5. 统计学分析

实验结果

1. TMP 对大鼠腹腔巨噬细胞分泌VEGF 的影响

2. TMP 对大鼠腹腔巨噬细胞增殖的影响

3. TMP 对受LPS 刺激后巨噬细胞表达HIF-1α的影响

小结

附图

讨论

1. 血管生成、VEGF 与类风湿关节炎

1.1 血管生成与类风湿关节炎

1.2.V EGF 与类风湿关节炎

1.2.1.V EGF 的生物功能

1.2.2.V EGF 在RA 中高表达

1.2.3.V EGF 在RA 中产生来源与调节因素

1.2.4.V EGF 在RA 发病中的作用

1.2.5.V EGF 在RA 治疗中的作用

2. 川芎嗪抗RA 作用及机制

3. 阳性对照药物的选择

4. 人类RA 模型-CIA 的选用

4.1.CIA 模型的主要特点

4.2 胶原性关节炎与佐剂性关节炎的比较

结论

创新性及意义

思考与展望

参考文献

综述1. 血管内皮生长因子研究进展

综述2. 中药抗血管生成研究进展

致谢

攻读学位期间发表的论文

发布时间: 2005-07-22

参考文献

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