雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

论文摘要

目的骨质疏松症（OP）是一种以骨量减少、骨微结构改变为特征的代谢骨疾病。在骨代谢中,雌激素和细胞生长因子具有重要作用。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）,既是血管生成因子,又是骨生长因子。它通过对成骨细胞及破骨细胞的增殖分化和活性的调节起作用。本实验通过体外培养成骨细胞,然后以不同浓度雌激素干预24h后,应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法观察成骨细胞VEGF表达情况,探讨雌激素对成骨细胞上VEGF表达的影响。方法选取新生48h大鼠六只,摘取颅盖骨,经酶解消化得到成骨细胞,并进行体外培养。通过碱性磷酸酶染色（ALP染色）和矿化结节染色完成成骨细胞的鉴定。取第4代成骨细胞,随机分为5组,分别给予Omol/L、10-10mol/L,10-8mol/L,10-6mol/L, 10-4mol/L17β-雌二醇干预。干预24h后,应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测VEGF表达情况。结果1.细胞形态观察、细胞鉴定：倒置相差显微镜下见细胞接种后培养24h贴壁,细胞呈梭形,三角形和多角形等形态；碱性磷酸酶染色后,大多数细胞膜及胞浆中可见黑褐色颗粒。当细胞形成钙化结节后,进行茜素红染色,可见红色结节。2.经RT-PCR及免疫组织化学方法检测表明,VEGF在原代成骨细胞内稳定表达；半定量分析证实,不同17p-雌二醇剂量组间VEGF的表达量呈现一定规律,随着17β-雌二醇浓度的升高,VEGF的表达量逐渐增加,10-6mol/L左右时,VEGF的表达量最高,超过此剂量,VEGF的表达下降。结论VEGF在原代成骨细胞内稳定表达；雌激素促进成骨细胞上VEGF的表达上调,并存在剂量依赖性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验一 成骨细胞的分离、培养及鉴定
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 实验二 雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 血管内皮生长因子与骨质疏松
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢