注射用多西他赛脂质体的研究

论文摘要

本论文建立了多西他赛（Docetaxel,DOC）的体外分析方法,测定了DOC在不同介质中的溶解度和表观油/水分配系数。并对DOC在强酸、强碱、高温、氧化和光照射下的稳定性进行了考察。多西他赛是一种非水溶性,且脂溶性也不高的分子。在采用常规处方及制备方法时,存在载药量低,制成脂质体不稳定的缺点。理想的脂质体模式是将药物以微晶或其它不溶状态包裹于脂质体内,从而实现较高的载药量,但由于多西他赛脂质体还存在易析出结晶的问题,因此欲使制备的脂质体相对稳定需对形成脂质体膜的材料进行深入改进,使其与药物亲和性增加,阻止药物穿过,从而提高脂质体的稳定性。基于此,我们在处方设计上,加入新型膜稳定材料,如胆固醇硫酸酯钠、十二烷基磺酸钠等离子型两亲物质;在工艺设计上,提出乳化挥散法制备多西他赛脂质体。具体过程是将药物、脂质体膜材及膜稳定材料溶解于有机溶剂如二氯甲烷中,然后倒入水相中,经适当乳化设备乳化形成O/W乳剂,由于膜材大多为二亲性物质,因此乳化后主要存在于乳剂的界面膜上,在挥散除去有机溶剂后,药物可有效的包封于脂质体内。经过处方及工艺优化,最终成功制备了多西他赛脂质体,载药量为96.9%,平均粒径111.9nm,粒径分布50～200nm,室温放置可稳定。对冻干过程和冻干保护剂处方进行了考察,确定了最佳工艺和冻干保护剂处方,预冻温度为-40℃,预冻时间为4h,干燥时间确定为36h,及10%的乳糖。对冻干后脂质体的性质进行了考察,包括粒径分布,包封率等,表明冻干后多西他赛脂质体基本保持原来的性质。研究了多西他赛脂质体冻干品的理化性质如:形态、粒径分布、Zeta电位、pH等。考察了多西他赛脂质体在5%葡萄糖注射液和Tris-HCl缓冲液中的释放度。并对多西他赛脂质体的初步稳定性进行了考察,结果表明在加速、室温条件下放置3个月后,多西他赛脂质体冻干品外观性状,主药含量,包封率及粒径各项参数无显著性变化,说明其稳定性良好。考察了多西他赛脂质体的初步安全性,结果表明,多西他赛脂质体在体外不溶血,且刺激性明显优于注射液。建立了生物样品中多西他赛的HPLC分析方法,研究了其体内药动学参数,结果表明其半衰期延长,生物利用度明显提高。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 多西他赛脂质体处方前研究
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 2 方法与结果
• 2.1 DOC含量测定分析方法的建立
• 2.1.1 最大吸收波长的选择
• 2.1.2 色谱条件
• 2.1.3 方法专属性试验
• 2.1.4 线性关系的考察
• 2.1.5 回收率试验
• 2.1.6 精密度考察
• 2.1.6.1 日内精密度的测定
• 2.1.6.2 日间精密度的测定
• 2.1.7 溶液稳定性的考察
• 2.2 二氯甲烷残留量的测定
• 2.2.1 色谱条件
• 2.2.2 溶液的配制
• 2.2.3 线性关系测定
• 2.2.4 精密度试验
• 2.2.5 回收率试验
• 2.2.6 重复性试验
• 2.2.7 最低检测限
• 2.3 DOC溶解度的测定
• 2.4 油/水分配系数的测定
• 2.5 稳定性研究
• 2.5.1 实验方法
• 2.5.2 酸对多西他赛稳定性的影响
• 2.5.3 碱对多西他赛稳定性的影响
• 2.5.4 氧化对多西他赛稳定性的影响
• 2.5.5 高温对多西他赛稳定性的影响
• 2.5.6 光照对多西他赛稳定性的影响
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 第二章 多西他赛脂质体处方筛选及工艺研究
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 2 方法和结果
• 2.1 脂质体的制备工艺筛选
• 2.1.1 脂质体制备方法的选择
• 2.1.1.1 薄膜分散法
• 2.1.1.2 乙醇注入法
• 2.1.1.3 乳化挥散法
• 2.1.2 制备方法比较
• 2.2 脂质体的制备工艺研究
• 2.2.1 制备DOC脂质体的工艺流程
• 2.2.2 有机溶剂的选择
• 2.2.3 乳化温度的确定
• 2.2.4 乳化时间
• 2.2.5 挥散二氯甲烷方式的选择
• 2.2.6 挥散二氯甲烷温度及搅拌速度的考察
• 2.3 脂质体处方初步筛选
• 2.3.1 磷脂种类的选择
• 2.3.2 其它膜材的选择
• 2.3.3 表面活性剂的选择
• 2.4 脂质体处方进一步确定
• 2.4.1 药脂比的确定
• 2.4.2 鱼油乙酯与磷脂比例的确定
• 2.4.3 PEG2000-DSPE及SCS用量的确定
• 2.4.4 缓冲液种类及pH值的考察
• 2.4.5 有机溶剂与缓冲液比例的考察
• 2.5 最终处方及工艺
• 2.5.1 制剂处方
• 2.5.2 制备工艺
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 第三章 多西他赛脂质体冻干制剂研究
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 2 方法与结果
• 2.1 冻干工艺考察
• 2.1.1 预冻温度的考察
• 2.1.2 预冻速度的考察
• 2.1.3 预冻时间的考察
• 2.1.4 干燥时间的考察
• 2.2 冻干处方的筛选
• 2.2.1 冻干支持剂的选择指标
• 2.2.2 冻干支持剂的加入方式
• 2.2.3 支持剂种类的考察
• 2.2.4 冻干保护剂浓度的考察
• 2.2.5 冻干曲线的绘制
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 多西他赛脂质体冻干品理化性质研究
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 2 方法与结果
• 2.1 理化性质
• 2.1.1 外观形态
• 2.1.2 粒度和粒径分布
• 2.1.3 脂质体的表面电位
• 2.1.4 脂质体混悬液pH值
• 2.2 含量测定
• 2.3 包封率的测定
• 2.3.1 测定方法确定
• 2.3.2 膜对药物吸收的考察
• 2.3.3 药物在水相中的存在状态的考察
• 2.3.4 测定结果
• 2.4 二氯甲烷残留量的测定
• 2.5 体外释放考察
• 2.5.1 突释效应考察
• 2.5.2 Tris-HCl缓冲液和葡萄糖注射液中的释放度研究
• 2.5.3 释药机理初步探讨
• 2.6 加速试验及留样观察
• 2.6.1 加速实验
• 2.6.2 室温留样观察
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 第五章 初步安全性及大鼠体内药动学考察
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 1.3 动物
• 2 方法与结果
• 2.1 溶血性试验
• 2.2 兔耳缘静脉刺激试验
• 2.3 过敏性试验
• 2.4 药动学研究
• 2.4.1 血样中多西他赛含量测定
• 2.4.1.1 色谱条件
• 2.4.1.2 溶液的配制
• 2.4.1.3 大鼠血浆样品处理
• 2.4.2 方法学考察
• 2.4.2.1 方法的专属性
• 2.4.2.2 标准曲线的制备及其最低检测浓度考察
• 2.4.2.3 回收率试验
• 2.4.2.4 精密度试验
• 2.4.3 多西他赛脂质体大鼠药动学研究
• 2.4.3.1 参比试剂的制备
• 2.4.3.2 实验方案
• 2.4.3.3 实验数据
• 2.4.3.4 数据处理
• 3 讨论
• 4 小结
• 全文结论
• 参考文献
• 发表论文
• 致谢