水稻没顶淹涝早期差异表达基因分析

论文摘要

我国每年因洪涝灾害引起的粮食减产相当严重,特别是在南方的一些低洼地区,洪水要经过相当长的时间才能退去,这使得水稻（Oryza sativa L）这一南方主要的粮食作物受淹涝后产量降低甚至死亡。因此,弄清水稻的耐淹机理,可使人们找到相应的方法来提高水稻的耐涝性,从而提高粮食的产量。本研究以水稻耐淹品种FR13A为实验材料,对其在分蘖期进行没顶淹涝处理。分别取淹涝0 h,2 h,4 h,8 h,16 h,32 h的叶片进行mRNA差异显示分析,获得8个差异表达的cDNA片段。利用反式Northern斑点杂交法去除4个假阳性片段,对4个阳性片段（DF8、DF9、DF10、DF11）测序后进行同源性分析,其中一个片段（DF8）的蛋白产物与WD-40重复蛋白高度同源,另一个（DF11）与植物生长素应答蛋白有较高同源性,其余两个没有找到同源蛋白质序列。由于是在淹涝早期取材进行实验,所得cDNA克隆很可能是一些调控基因,它们参与了淹涝信号从细胞外传递到细胞内从而诱导相关基因表达的信号转导过程。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 研究的目的和意义
• 2 概述
• 3 影响水稻耐淹时间的主要环境因素
• 3.1 光照强度
• 3.2 温度
• 2含量'>3.3 CO₂含量
• 4 淹涝对水稻的影响
• 4.1 对水稻茎秆的影响
• 4.2 对根系的影响
• 4.3 对产量构成的影响
• 4.4 对细胞质膜的影响
• 4.5 呼吸作用相关酶的变化
• 5 水稻耐淹涝生理基础
• 5.1 通气
• 5.2 细胞伸长生长
• 5.3 提高细胞分裂活性
• 5.4 碳源供给
• 5.5 激素信号的传递
• 6 mRNA差异显示技术的原理与优化
• 6.1 mRNA差异显示技术原理
• 6.2 mRNA差异显示技术的参数优化
• 6.2.1 引物改进
• 6.2.2 PCR退火温度
• 6.2.3 NTP的浓度
• 6.2.4 差异显示凝胶的选择
• 6.2.5 减少假阳性的措施
• 6.2.6 差异片段的验证
• 6.2.7 几种非同位素差异显示方法的比较
• 7 差异显示的衍生技术
• 7.1 荧光差异显示
• 7.2 定向差异显示
• 7.3 与扣除杂交结合的差异显示
• 7.4 与cDNA微列阵技术结合的差异显示
• 7.5 以RFLP为基础的差异显示
• 第二章 水稻没顶淹涝早期差异表达基因分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料处理与取材
• 1.2 总RNA提取及质量检测
• 1.3 cDNA第一链的合成
• 1.4 反转录产物的PCR扩增
• 1.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳与银染
• 1.6 差异片段的回收
• 1.7 差异片段的重扩增
• 1.8 差异片段的纯化
• 1.9 差异片段的反式Northern斑点杂交
• 1.10 阳性片段的克隆测序
• 1.10.1 差异片段与载体的连接
• 1.10.2 感受态细胞的制备与转化
• 1.10.3 蓝白斑筛选
• 1.10.4 菌落PCR
• 1.11 序列分析
• 2 结果与分析
• 2.1 提取RNA的质量检测
• 2.2 淹涝处理后的基因差异表达分析
• 2.3 差异条带的回收与重扩增
• 2.4 反式Northern斑点杂交结果
• 2.5 蓝白斑筛选和菌落PCR结果
• 2.6 阳性片段的测序结果
• 2.7 序列分析及相似性比较
• 3 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介