拮抗菌对冬枣采后病害的生物防治

论文摘要

本文以冬枣采后保鲜效果为前提,以生物防治冬枣采后病害为宗旨,研究了冬枣采后病害的发生,并对其主要病原物进行了鉴定;随之以引发采后主要病害的病原物为靶标,在枣果上进行了拮抗菌的筛选;拮抗菌分类地位的鉴定;进一步对拮抗菌抑制冬枣采后病害的效果开展了研究,并对其产生的生防潜力进行了拮抗机理的初步探索。结果如下:本研究以不同地区枣果主栽区的冬枣为试材,在2004-2005连续两年对其采前和采后侵染病果进行了多批次分离,依据柯赫氏法则对所分离的病原菌进行了致病性测定。通过对不同致病菌株及其近源属种的核糖体5.8S rDNA及其侧翼ITS1和ITS2区的核苷酸序列分析,结合形态观察的方法,发现引起冬枣采后病害的病原物主要有细交链格孢（Alternaria alternata）、多隔镰孢霉（Fusarium decemcellulare Brick）、扩展青霉（Penicillium expansum）和美澳核果褐腐串珠霉（Monilia fructicola）。冬枣采后病害的生物防治,以主要病原菌细交链格孢为靶标筛选拮抗菌。基于拮抗菌在生境位的适应能力和有效定殖,从枣果面和伤口分离和筛选拮抗菌。通过活体（in vivo）的方法,筛选到4种对A. alternata有较好生防效果的拮抗菌,其中一种为拮抗细菌B501,另3种为拮抗酵母菌XY103,XY201和XY801。拮抗细菌和拮抗酵母菌分别依据核糖体16S rDNA和26S D1/D2及ITS区核苷酸序列的比较,结合表型特征的观察和生理生化特性的测定,B501被鉴定为成团泛菌（Pantoea agglomerans）;拮抗酵母菌XY103, XY201和XY801分别被鉴定为梅奇属（Metschnikowia）酵母的3个新种Metschnikowia sinensis sp. nov., Metschnikowia zizyphicola sp. nov.和Metschnikowia shanxiensis sp. nov.由于这4种拮抗菌都是首次从枣果表面分离,特别是酵母菌为3个新种,因此对其生防潜力进行了系统的研究。本研究采用枣果刺伤接种和浸泡接种两种方法,对成团泛菌B501和梅奇酵母新种M. zizyphicola XY201进行了抑病效果试验。结果表明,成团泛菌B501以低的浓度1×107 cfu mL-1可有效控制由细交链格孢引发的冬枣病害,其发病率控制在20%以下,显著地好于浓度为1×105cfu mL-1和对照;梅奇酵母种XY201以浓度1×106cfu mL-1或1×107 cfu mL-1使用时,可使该病害的发生率控制在8%以下,与浓度为50μg mL-1的化学杀菌剂扑海因防效相当。同时发现,梅奇酵母种XY201对冬枣采后其它病原物多隔镰孢霉（F. decemcellulare Brick）、扩展青霉（P. expansum）和美澳核果褐腐串珠霉（Mon. fructicola）都有显著的抑制效果。这表明梅奇酵母种XY201是一株有效的广谱性拮抗菌。这两种拮抗菌的生防效力可以通过改良剂氯化钙而得以提高,而且与

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 果蔬采后病害的生物防治
• 1.1.1 果蔬采后病害的发生
• 1.1.2 果蔬采后病害的防治
• 1.1.3 拮抗菌防治果蔬采后病害的研究进展
• 1.2 分子生物学技术在病原真菌和拮抗菌鉴定中的应用
• 1.2.1 DNA（G+C）mol%值
• 1.2.2 DNA 分子杂交技术
• 1.2.3 限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP）分析
• 1.2.4 随机扩增多态性DNA（Random amplified polymorphic DNA, RAPD）分析
• 1.2.5 核糖体（rRNA）序列分析
• 1.3 本研究的目的与意义
• 第二章 冬枣采后病害部分病原菌的鉴定
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 样品采集
• 2.2.2 病原物分离与纯化
• 2.2.3 病原物的致病性测定
• 2.2.4 病原物鉴定
• 2.3 结果
• 2.3.1 病原菌的分离率及致病性测定结果
• 2.3.2 病原菌的形态特征
• 2.3.3 病原菌的分子鉴定
• 2.4 讨论
• 第三章 拮抗菌的分离与筛选
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 病原菌
• 3.2.2 果实
• 3.2.3 筛选方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 第四章 拮抗菌的鉴定
• 4.1 拮抗细菌B501 的鉴定
• 4.1.1 引言
• 4.1.2 材料与方法
• 4.1.3 结果
• 4.1.4 讨论
• 4.2 拮抗酵母菌梅奇属三个新种XY103, XY201 和XY801 的鉴定
• 4.2.1 引言
• 4.2.2 材料与方法
• 4.2.3 结果
• 4.2.4 讨论
• 第五章 拮抗菌对病原物的抑制效果
• 5.1 引言
• 5.2 成团泛菌B501 对冬枣采后细交链格孢（A. alternata）的抑制
• 5.2.1 材料与方法
• 5.2.2 结果
• 5.3 梅奇酵母菌Metschnikowia zizyphicola XY201 对冬枣采后病原物的抑制
• 5.3.1 材料与方法
• 5.3.2 结果
• 5.4 讨论
• 第六章 拮抗菌生防机理的初步研究
• 6.1 拮抗菌在冬枣上的定殖能力
• 6.1.1 引言
• 6.1.2 材料与方法
• 6.1.3 结果
• 6.1.4 讨论
• 6.2 拮抗菌的活细胞和培养滤液对采后冬枣病害的抑制
• 6.2.1 引言
• 6.2.2 材料与方法
• 6.2.3 结果
• 6.2.4 讨论
• 6.3 成团泛菌B501 的群体感应系统
• 6.3.1 引言
• 6.3.2 材料与方法
• 6.3.3 结果
• 6.3.4 讨论
• 结论和主要创新点
• 参考文献
• 附录（图版）
• 缩略词
• 致谢
• 作者简介