论文摘要
目的：通过酶联免疫吸附法（ELISA）测定不吸烟的健康人、吸烟但肺功能正常人群及COPD相关肺动脉高压患者血清、外周血单核细胞中Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（ROCK1）水平,比较三组研究对象血清、外周血单核细胞中ROCK1中的表达规律,探讨Rho/Rho激酶信号通路在COPD相关肺动脉高压中的作用。方法：1.研究对象选取2010年12月至2011年4月在长沙市三医院呼吸内科住院的慢性阻塞性肺疾病（COPD）相关性肺动脉高压患者10人（男性6名,女性4名,平均年龄65.4±8.0岁）（C组）,同期在长沙市三医院体检的健康不吸烟者10人（男性5名,女性5名,平均年龄62.5±7.0岁）（A组）,以及吸烟肺功能正常者10人（男性7名,女性3名,平均年龄63.7±9.0岁）（B组）。其中C组病人同时符合中华医学会呼吸分会2007年制定的（慢性阻塞性肺疾病诊治指南）的诊断标准及ESC2009年制定的（肺动脉高压诊断与治疗指南）的诊断标准。三组在年龄、性别、体重上尽量匹配。2.肺功能测定所有研究对象均进行肺功能测定,主要测定指标为用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气容积（FEV1）、FEV1/FVC及FEV1占预计值的百分比（FEV1%）。吸入支气管扩张剂（沙丁胺醇400ug）后FEV1/FVC仍低于70%,且经超声心动图证实有肺动脉高压者为C组纳入标准。肺功能正常者根据是否吸烟分至B组或A组。3.肺动脉收缩压的测定所有研究对象均通过超声心动图测定安静状态下肺动脉收缩压（PASP）。4.血清Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（ROCK1）水平测定①标本采集：抽取各研究对象空腹静脉血3ml,离心（3000R/15min20℃）留取上层血清1ml,存放于-80℃低温冰箱中待测。②测定方法：血清Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1 （ROCK1）水平检测采用酶联免疫吸附法（ELISA）,其中标本处理、测定方法和样本浓度计算均按相关试剂盒说明书进行。5.外周血单核细胞中Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK1）水平测定①标本采集：抽取各研究对象空腹静脉血20ml,以percoll非连续密度梯度离心沉降法分离单个核细胞,并培养使单核细胞贴壁。再用细胞刮轻轻刮下,存放于-80℃低温冰箱中待测。②测定方法：将单核细胞收集后以反复冻融法裂解,离心后取上清液采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测单核细胞中ROCK1水平。其中标本处理、测定方法和样本浓度计算均按相关试剂盒说明书进行。结果1.三组研究对象中C组肺动脉收缩压显著高于A组与B组,有统计学意义（P均<0.01）。B组肺动脉收缩压高于A组,有统计学差异（P<0.05）。2.三组研究对象中C组血清ROCK1水平高于A组,两者之间有统计学差异（P<0.05）；C组血清ROCK1水平高于B组,两者之间有统计学意义（P<0.05）；A组与B组之间血清ROCK1水平无统计学差异（P>0.05）。3.三组研究对象中C组外周血单核细胞中ROCK1水平高于A组,两者之间有统计学差异（P<0.05）；C组外周血单核细胞中ROCK1水平高于B组,两者之间有统计学意义（P<0.05）：A组与B组之间外周血单核细胞中ROCK1水平无统计学差异（P>0.05）。4.三组研究对象中C组单核细胞计数高于A、B两组,有统计学意义（P<0.05）。5.三组研究对象中血清ROCK1水平与肺动脉收缩压呈正相关关系（r=0.736,P<0.05）；外周血单核细胞中ROCK1水平与肺动脉收缩压呈正相关关系（r=0.661,P<0.05）。结论1.三组研究对象中COPD相关肺动脉高压患者血清及外周血单核细胞中ROCK1水平较其它两组高,提示Rho激酶在肺动脉高压发病机制中具有重要意义,血清及单核细胞中ROCK1水平可能反应COPD相关肺动脉高压患者的病情严重程度。2.三组研究对象中COPD相关肺动脉高压患者外周血单核细胞计数较其它两组高,提示ROCK1水平升高可能与炎症细胞增多有关3.吸烟者在未出现COPD时,肺动脉压力已较健康人组高,提示吸烟可导致肺动脉压力升高。但吸烟指数与肺动脉收缩压的关系有待扩大样本量后进一步研究。