重组低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能调控的实验研究

论文摘要

低氧诱导因子-1α是在缺氧条件下的一个重要的氧依赖转录激活因子,在低氧状态下对成骨细胞的功能有调控作用,在常氧下极易降解,与其降解有关的结构域称之为氧依赖的结构域。本研究通过分子克隆的方法体外重组低氧诱导因子-1α,删除了低氧诱导因子-1α的氧依赖结构域,构建了真核表达质粒pVAX1-HIF-1α,并对重组质粒进行了表达鉴定。将重组质粒pVAX1-HIF-1α转染到原代培养的鼠成骨细胞中,采用各种细胞生物学方法观察了重组质粒pVAX1-HIF-1α在正常氧浓度下对成骨细胞成骨功能调控的作用。实验结果显示,通过RT-PCR和Westernblot的方法,对HIF-1α的靶基因VEGF和成骨标志性基因骨钙素和核结合因子a1的mRNA和蛋白水平检测,以及应用MTT方法和碱性磷酸酶的定量检测,证实重组质粒pVAX1-HIF-1α在正常氧浓度下对成骨细胞的增殖、分化和矿化均有调控功能。本研究为基因治疗骨折愈合提供了新思路。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词表
• 第一章 文献综述
• 综述一 低氧诱导因子-1α的研究进展
• 1 HIF-1α的结构与功能
• 2 HIF-1α的氧调节机制
• 3 HIF-1α的非氧依赖调节
• 4 HIF-1α对细胞双向调节的作用
• 5 HIF-1α对下游靶基因的转录调节作用
• 6 HIF-1α对VEGF的调控机制
• 7 HIF-1α和VEGF促进血管新生的机制
• 8 HIF-1α对骨折愈合的调控
• 综述二 生长因子对成骨细胞作用的研究进展
• 1 成骨细胞发展阶段及骨形成机制
• 2 骨折愈合中细胞生长因子的作用
• 第二章 实验部分
• 实验一 重组HIF-1α真核表达质粒的构建和鉴定
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 实验二 鼠成骨细胞的培养、鉴定及转染条件优化
• 1 实验器材
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 实验三 重组HIF-1α真核表达质粒对成骨细胞功能调控的实验研究
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 攻读博士期间发表的论文
• 致谢
• 中文摘要
• Abstract