莱克多巴胺分子印迹仿生酶联免疫方法的建立

论文摘要

本课题采用有机无机杂化法,以莱克多巴胺为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,γ-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷为交联剂,合成了对莱克多巴胺具有特异吸附功能的分子印迹膜。实验对聚合反应条件进行了详细讨论,通过红外分析、吸附容量实验和吸附动力学实验,对分子印迹膜的性能进行了表证。以所合成的分子印迹膜作为仿生抗体建立了直接竞争仿生酶联免疫分析方法（ELISA）.莱克多巴胺分子印迹膜表现出了类似抗体的特异吸附性能,具有选择性高、稳定性好、传质速度快等优点,非常适合于酶联免疫分析。实验结果表明：与非印迹膜相比,莱克多巴胺分子印迹膜具有较高的选择吸附性能和较快的传质速度,在莱克多巴胺浓度为20mg L-1时,吸附10min时吸附容量为0.46μg well-1,达到最大吸附容量的67.5%,60min之后吸附基本上达到平衡。在最适的分析条件下,所建立的仿生酶联免疫方法的灵敏度即IC50为15.77μgL-1,最低检出限即IC15为0.01μg L-1。为了验证方法的可行性,将该方法用于尿液和猪肉中莱克多巴胺的检测,回收率分别为77.7%-108.9%（尿液）,93.5-101.1%（猪肉）,用高效液相色谱法进行验证,二者相关性很好（R2分别为0.9974和0.9922）,说明所建立的仿生酶联免疫分析方法用于实际样品中莱克多巴胺的检测是可行的。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 兽药残留
• 2-肾上腺素受体兴奋剂'>1.2 β₂-肾上腺素受体兴奋剂
• 2-肾上腺素受体兴奋剂简介'>1.2.1 β₂-肾上腺素受体兴奋剂简介
• 1.2.2 莱克多巴胺简介
• 1.3 莱克多巴胺检测方法
• 1.3.1 色谱分析方法
• 1.3.2 免疫分析法
• 1.4 分子印迹技术
• 1.4.1 分子印迹技术概述
• 1.4.2 分子印迹技术原理与特性
• 1.4.3 分子印迹聚合物的设计
• 1.4.4 分子印迹技术的应用
• 1.5 本课题研究内容及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料与试剂
• 2.2 实验仪器
• 2.3 测定用试剂
• 2.4 莱克多巴胺分子印迹及非印迹膜的制备
• 2.4.1 莱克多巴胺溶解性实验
• 2.4.2 莱克多巴胺聚合物膜的制备
• 2.5 莱克多巴胺分子印迹膜的性能表征
• 2.5.1 红外光谱特征分析
• 2.5.2 紫外分光光度计测试条件的确定
• 2.5.3 吸附平衡结合实验
• 2.5.4 吸附动力学实验
• 2.5.5 结构分析
• 2.6 莱克多巴胺酶标抗原的制备-linker法
• 2.7 直接竞争ELISA方法操作步骤
• 2.8 标准曲线的建立
• 2.9 BELISA反应体系条件的选择及优化
• 2.10 方法特异性实验
• 2.11 实验样品的准备及添加回收实验
• 2.12 液相色谱方法验证
• 3 结果与讨论
• 3.1 傅立叶红外光谱分析
• 3.2 紫外分光光度计测试条件的确定
• 3.3 影响聚合物合成和吸附性能的因素
• 3.3.1 反应溶剂的选择
• 3.3.2 模板分子、功能单体和交联剂的配比
• 3.3.3 聚合温度的确定
• 3.3.4 模板分子的去除
• 3.4 莱克多巴胺分子印迹膜性能评价
• 3.4.1 吸附性能
• 3.4.2 吸附动力学特性
• 3.4.3 结构特性
• 3.5 莱克多巴胺酶标的合成
• 3.6 BELISA条件优化
• 3.6.1 酶标浓度的优化
• 3.6.2 标样稀释液的优化
• 3.6.3 分子印迹膜厚度的优化
• 3.7 BELISA方法的分析特征量
• 3.8 BELISA方法的选择性
• 3.9 实际样品测定及准确性分析
• 3.9.1 猪肉样品
• 3.9.2 尿样
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况
• 8 致谢