槐耳清膏在肝癌介入治疗中作用机制的实验研究

论文摘要

目的观察槐耳清膏体外抑制肝癌细胞生长的影响；观察槐耳清膏联合经肝动脉化疗栓塞对兔VX2肝癌肝功能、VEGF、MVD、肿瘤生长及转移的影响。观察槐耳清膏联合经肝动脉化疗栓塞对兔VX2肝癌细胞凋亡及其相关蛋白P53、Bax和Bcl-2表达的影响。为槐耳清膏联合TACE治疗肝癌提供理论依据。材料与方法人肝癌细胞株Hep-G2采用DMEM培养基（含10％胎牛血清）培养。取对数生长期的肝癌Hep-G2细胞，分别与DMEM（含10％胎牛血清）和含槐耳清膏不同浓度（1mg／ml，2mg／ml，4mg／ml，8mg／ml）的DMEM培养液（含10％胎牛血清）作用24小时、48小时、72小时后，应用MTT比色法检测肝癌细胞的增殖情况，用流式细胞仪检测肝癌细胞的凋亡情况。将VX2瘤粒直接种植于新西兰大白兔左肝内2周，将36只MRI证实已成功接种VX2的荷瘤兔随机分为3组，每组12只，开腹经肝动脉穿刺分别给予不同处理：A组为生理盐水对照组，经肝动脉注入0.2ml／kg体重生理盐水；B组为TACE组，经肝动脉注入超液态碘化油0.2ml／kg+丝裂霉素0.5mg／kg乳剂；C组为TACE+槐耳清膏灌服组，TACE方法同B组，同时术后每天灌服槐耳清膏500mg／kg。介入治疗前1天及治疗后3天、7天、14天抽血检测血清的ALT和AST。每天观察动物生长情况，术后二周处死动物，测量动物体重、肿瘤体积、肿瘤坏死区面积，计算肿瘤生长率、坏死率；观察肝、肺及腹腔淋巴结转移情况；用免疫组织化学方法检测各组肿瘤细胞Ⅷ因子、VEGF、P53、Bax和Bcl-2蛋白的表达情况，对Ⅷ因子染色阳性血管内皮细胞进行MVD计数；用TUNEL法检测各组肿瘤细胞的凋亡指数。结果MTT结果显示：在槐耳清膏浓度为1-8mg／ml，分别处理细胞24小时、48小时、72小时后，与对各自对照组相比（p＜0.05），其能明显抑制Hep-G2细胞的增殖，随着槐耳清膏药物浓度的增加，细胞存活率降低，A值变小，IR值增大，呈量效关系。流式细胞仪检测结果显示：槐耳清膏能明显诱导肝癌细胞凋亡，在槐耳清膏浓度为1-8mg／ml时，分别处理细胞24小时、48小时、72小时后，其诱导Hep-G2细胞的凋亡率与对照组相比均有显著性差异（p＜0.05），随着槐耳清膏药物浓度的增加，时间延长，其诱导Hep-G2细胞的凋亡率逐步增加。术前1天3组动物体重、肿瘤体积无显著性差异（P＞0.05）。术后2周，B组动物体重下降明显，与A组、C组相比差异均有显著性（P＜0.05）；A组与C组相比差异无显著性（P＞0.05）。介入治疗前1d，3组动物ALT、AST水平差异无显著性；介入治疗后3、7d，3组动物ALT和AST水平相比差异有统计学意义（F=28.411，55.537 P＜0.05；F=8.565，6.401 P＜0.05），C组与B组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗后2周肿瘤体积、肿瘤生长率和肿瘤坏死率B组、C组与A组相比差异均具有显著性（P＜0.01），B组与C组相比差异亦具有统计学意义（P＜0.05）。肝和肺的转移B组与A组相比差异无显著性（P＞0.05），C组与B组、A组相比差异均具有统计学意义（P＜0.05）；腹腔淋巴结转移3组相比差异无显著性（P＞0.05）。3组动物MVD值和VEGF的表达强度以C组最低，B组最高，3组相比差异有统计学意义（F=5.22，P=0.011；x2=7.247，P=0.027 P＜0.05），C组与B组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。A组的肿瘤细胞凋亡指数最小（7.31±2.85％），C组的肿瘤细胞凋亡指数最高（15.73±2.89％）；3组动物肿瘤细胞的凋亡指数相比差异有统计学意义（P＜0.05），C组与B组（12.83±3.51％）相比差异有统计学意义（P＜0.05）。3组动物肿瘤细胞的Bax蛋白表达阳性率A组（16.67％）最低，C组（83.33％）最高；P53和Bcl-2蛋白表达阳性率C组最低（25.00％，16.67％），A组最高（91.67％，83.33％）；3组动物肿瘤细胞的P53、Bax和Bcl-2蛋白表达阳性率相比差异有统计学意义（P＜0.05），C组与B组相比相比差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论槐耳清膏体外能抑制Hep-G2细胞增殖，诱导Hep-G2细胞凋亡；槐耳清膏改善动物TACE术后的生存质量；槐耳清膏改善动物TACE术后的肝功能；槐耳清膏抑制肿瘤生长，促进肿瘤坏死；槐耳清膏抑制肿瘤转移；槐耳清膏通过减少VEGF表达，抑制肿瘤血管生成；槐耳清膏通过促进肝癌细胞Bax蛋白表达增高，使P53和Bcl-2蛋白表达下降，导致肝癌细胞的凋亡增加；槐耳清膏对HCC有治疗作用。

论文目录

• 缩略语中英文对照表
• 前言
• 摘要
• Abstract
• 第一部分:槐耳清膏体外抑制肝癌细胞生长的实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分:槐耳清膏联合TACE抑制兔VX2肝癌增殖的实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分:槐耳清膏联合TACE诱导兔VX2肝癌细胞凋亡的实验研究
• 资料与方法
• 结果
• 附图
• 讨论
• 参考文献
• 文献综述:肝癌介入治疗研究进展
• 参考文献
• 附录1:攻读学位期间完成及参加科题目录
• 附录2:攻读学位期间发表论文目录
• 致谢