论文摘要
[目的]近年来，淋巴瘤的临床治疗主要采用化疗、放疗及造血干细胞移植。随着对肿瘤发生分子机制的认识，淋巴瘤靶向治疗已成为一种新的治疗模式，目前淋巴瘤靶向治疗主要包括单克隆抗体、放射免疫治疗、特异性酶抑制剂、肿瘤疫苗等。PS-341是首个进行临床研究的蛋白酶体抑制剂，已应用于治疗多发性骨髓瘤及部分非霍奇金淋巴瘤。本实验旨在进一步研究PS-341对淋巴瘤的抗肿瘤作用，我们以霍奇金淋巴瘤细胞株L428及T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat为实验对象，观察PS-341对淋巴瘤细胞的凋亡诱导作用及其可能机制，同时观察PS341联合阿霉素对淋巴瘤细胞是否具有协同作用，为临床应用提供理论依据。[方法]1．采用MTT比色法检测PS-341对人淋巴瘤细胞株L428和Jurkat体外生长的抑制作用。2．瑞氏-姬姆萨（Wright-Giemsa）染色，油镜下观察细胞形态。3．应用流式细胞仪，Annexin V和PI双染色，周期分析检测细胞凋亡。4．Western-blot法检测对L428和Jurkat细胞Bcl-2，Bax，Caspase8，Caspase3和PARP蛋白表达水平的影响。5．采用MTT比色法检测PS341联合阿霉素作用下，L428和Jurkat细胞株对PS-341的敏感性变化。[结果]1．PS-341抑制淋巴瘤细胞的生长，呈浓度依赖性：MTT比色法检测结果显示，PS341或阿霉素处理L428及Jurkat细胞24h、48h、72h，都能够明显抑制细胞增殖，且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P＜0.01），呈浓度依赖性，PS341与阿霉素处理L428细胞24h、48h、72h后的IC50分别为391.82ng/ml、173.86ng/ml、49.9ng/ml和1955.56ng/ml、464.93ng/ml、74.77ng/ml；PS341与阿霉素处理Jurkat细胞24h、48h、72h后的IC50分别为137.64ng/ml、69.50ng/ml、31.23ng/ml和471.38ng/ml、226.57ng/ml、72.58ng/ml。2．PS-341诱导淋巴瘤细胞凋亡，呈浓度依赖性：采用瑞氏-姬姆萨染色，油镜下观察PS341作用L428及Jurkat前后细胞形态学变化，出现典型的凋亡形态学特征。以流式细胞分析技术研究了细胞DNA含量、亚二倍体及磷脂酰丝氨酸（PS）转位。结果显示，PS-341作用L428及Jurkat细胞24hr，细胞凋亡率与药物作用浓度呈正相关（P＜0.01）。3．PS-341对L428和Jurkat细胞Bcl-2，Bax，Caspase8，Caspase3和PARP蛋白表达水平的影响：PS341作用L428细胞后，随浓度的增加，Bcl-2蛋白表达下调，而Bax蛋白表达上调；而Caspase3，Caspase8和PARP蛋白都出现明显的剪切带。PS341作用Jurkat细胞后Caspase8，Caspase3和PARP蛋白均出现明显的剪切带；而Bcl-2与Bax蛋白表达无改变。4．阿霉素增强L428和Jurkat细胞对PS-341的敏感性：分别以远低于IC50剂量的阿霉素单独或联合PS341处理L428和Jurkat细胞24小时，MTT结果显示，在一定浓度范围内PS341联合阿霉素组生长抑制率大于PS341与阿霉素单药组作用下的抑制率之和；流式细胞仪分析显示PS341联合阿霉素组细胞凋亡率大于PS341与阿霉素单药组作用下的细胞凋亡率之和。[结论]1．在体外，PS-341可直接抑制淋巴瘤细胞L428和Jurkat的生长，呈浓度依赖性；其抑制作用与诱导细胞凋亡有关。2．对L428细胞，PS341能下调Bcl-2蛋白的表达水平，上调Bax蛋白的表达水平，改变Bcl-2家族抗凋亡因子和促凋亡因子的表达比例，同时Caspase8蛋白出现明显的剪切激活带，其诱导凋亡机制既与线粒体途径又与外源性途径有关；而对于Jurkat细胞，PS341作用后Caspase8蛋白也出现明显的剪切激活带，通过外源性途径诱导凋亡是其机制之一。3．阿霉素增强L428和Jurkat细胞对PS-341的敏感性，在一定浓度范围内，PS341联合阿霉素具有一定的协同作用。
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相关论文文献
- [1].PS341对他莫昔芬诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡影响及其机制的探讨[J]. 中华肿瘤防治杂志 2012(10)