消癌根、丹参注射液、吴茱萸碱对H22细胞体外抗肿瘤效应

论文摘要

本研究实验内容分为两部分,第一部分是中药复方消癌根抗肿瘤作用的研究,首先进行急性毒理实验以检测其临床用药安全性,然后按血清药理学方法进行消癌根对H22细胞体外抗肿瘤的实验研究;第二部分是丹参注射液、吴茱萸碱的体外抗肿瘤作用研究。先用MTT法检测丹参注射液、吴茱萸碱体外对H22细胞生长的影响,然后对其诱导H22细胞凋亡的机制进行研究。 方法:本文以体外培养的小鼠肝癌H22细胞株作为研究材料,分别进行中药复方和中药活性成分抗肿瘤的实验研究。（1）对中药复方消癌根进行急性毒理实验;（2）对中药复方消癌根进行血清药理学研究,制备中药复方消癌根含药血清。作用于H22细胞,镜下观察及用台盼蓝计数法观察H22细胞生长的影响,用流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡的情况。（3）用MTT法研究丹参注射液、吴茱萸碱对H22细胞生长的影响,绘制生长曲线,计算半数抑制浓度IC50值。（4）用甲基绿派诺宁染色观察凋亡细胞形态。（5）采用琼脂糖凝胶电泳观察凋亡的生化特征。（6）流式细胞技术PI染色法检测丹参注射液、吴茱萸碱对H22细胞诱导凋亡及对细胞周期的影响。统计分析用SPSS12.0软件完成,组问比较用LSD法。 结果:（1）消癌根Ⅰ号小鼠最大给药量为17.5g/kg.d（折合生药计算）,相当于成人（体重按60kg计算）临床日用剂量的105倍（>100倍）。（2）高剂量消癌根含药血清对H22细胞有生长抑制作用。48h存活率与相应的对照组相比,低剂量含药血清组细胞生存率没有显著差异。高剂量25%含药血清组为83.2±10.5%（P<0.05 vs control）,高剂量50%含药血清组为67.2±9.8%（P<0.01 vs control）。流式细胞仪检测显示高剂量组消癌根含药血清能诱导H22细胞凋亡:25%对照血清组的凋亡率为2.1%,高剂量25%含药血清组出现亚二倍体峰,凋亡率为8.8%;50%对照血清组的凋亡率为6.9%,50%含药血清组出现较典型的亚二倍体峰,凋亡率为11.5%,（P<0.01 vs control）。（3）丹参注射液、吴茱萸碱对H22细胞生长有明显的抑制作用,呈时间浓度依赖性。丹参注射液IC5024h、48h、72h分别为33.56mL/L、29.61 mL/L、12.70 mL/L。吴茱萸碱IC5024h、48h、72h依次为4.20mg/L、3.31mg/L、1.36mg/L。（4）5mL/L、10mL/L丹参注射液作用于H22细胞24h后,甲基绿派诺宁染色可见细胞凋亡形态,细胞核皱缩,核膜较为完整,染色质被染成绿色,与派诺宁的红色混合而呈蓝紫色,成块状或断裂成碎片,胞浆染成红色。丹参注射液组琼脂糖凝胶电泳图谱见典型DNA大片段条带,呈浓度依赖性,10mL/L丹参注射液组流式细胞仪直方图见典型亚二倍体凋亡峰,凋亡百分率为16.9%。0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、4.0mg/L吴茱萸碱作用于H22细胞24h后,琼脂糖凝胶电泳图谱未见DNAladder,作用48h后在4.0mg/L

论文目录

• 前言
• 第一部分 研究背景
• 一、细胞调亡及其与肿瘤的关系
• （一） 细胞凋亡
• 1.细胞凋亡与坏死的区别
• 2.细胞凋亡的形态学与生物化学特征
• 3.细胞调亡相关基因及其他调控因子
• 4.细胞调亡研究与检测方法
• （二） 细胞调亡与肿瘤
• 二、中药诱导肿瘤细胞调亡的研究进展
• （一） 中药成分诱导肿瘤细胞调亡的研究进展
• （二） 中药复方诱导肿瘤细胞调亡的研究进展
• （三） 结语
• 三、抗肿瘤中药的血清药理学研究进展
• （一） 关于血清药理学
• （二） 中药抗肿瘤的血清药理学研究现状
• （三） 结语
• 第二部分 实验研究
• 一、中药复方消癌根体外抗肿瘤作用的实验研究
• 实验（一） 消癌根急性毒理实验研究
• 1 材料与方法
• 2.结果
• 3 讨论
• 实验（二） 消癌根对小鼠肝癌细胞H22作用的血清药理学研究
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 二、丹参注射液、吴茱萸碱体外抗肿瘤作用的实验研究
• 实验（一） 丹参注射液、吴茱萸碱对小鼠肝癌H22细胞生长的影响
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 实验（二） 丹参注射液、吴茱萸碱对小鼠肝癌H22细胞诱导凋亡的机制研究
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 结语
• 参考文献
• 附图
• 致谢