角质形成细胞生长因子及其受体反义寡核苷酸对HaCaT细胞增殖的影响

论文题目: 角质形成细胞生长因子及其受体反义寡核苷酸对HaCaT细胞增殖的影响

论文类型: 博士论文

论文专业: 皮肤病与性病学

作者: 康尔恂

导师: 郑家润

关键词: 角质形成细胞生长因子,反义寡核苷酸,细胞,增殖,银屑病

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的 1．研究KGF对HaCaT细胞增殖、细胞周期、凋亡、增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的影响，探索KGF在银屑病表皮过度增殖环节的作用；2．研究角质形成细胞生长因子受体（KGFR）反义寡核苷酸（Antisense oligonucleotides，ASODN）对KGF促增殖效应的阻断作用，探索利用KGFR ASODN阻断KGFR靶位治疗银屑病的可能性。 方法 1．选择HaCaT细胞株体外培养；2．参照文献并利用primer5.0软件设计，合成2条针对KGFR mRNA的反义寡核苷酸序列（反义序列1和反义序列2）和作为参照的正义序列，利用阳离子脂质体（Lipofectamine）介导将KGFR ASODN转染HaCaT细胞，利用激光共聚焦显微镜检测转染效率；3．以MTT法、细胞生长曲线、平板集落形成试验检测KGF对HaCaT细胞的促增殖作用及KGFR ASODN对KGF诱导增殖的抑制作用；4．流式细胞仪检测KGF和KGFR ASODN对HaCaT细胞细胞周期、凋亡以及KGFR、增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。 结果 1．以系列浓度将反义序列1、反义序列2及正义序列寡核苷酸转染HaCaT细胞后，转染阳性细胞胞浆中可见黄绿色荧光颗粒，转染率呈浓度依赖性(EC50依次为：2.7μg／ml、2.8μg／ml、2.8μg／ml)；2．MTT实验表明，KGF作用24h后，KGF组增殖效应较对照组增强，增殖率呈浓度依赖性(EC50=5.6ng／ml)。高于0.25μg／ml浓度的反义序列1和反义序列2均可抑制KGF诱导的促HaCaT细胞增殖效应（P＜0.05），抑制率呈浓度依赖性(IC50依次为：3.2μg／ml、3.55μg／ml)。正义序列对KGF诱导的增殖效应无抑制作用（P＞0.05）；3．生长曲线显示，10ng／ml KGF作用下，HaCaT细胞生长加快，自培养第2d起各对应时间点细胞数较对照组增加（P＜0.05）。反义序列1和反义序列2均可抑制KGF诱导的HaCaT细胞的生长加快，自第2天起，对应时间点细胞数较KGF组减少（P＜0.05）。而正义序列对细胞生长无明显影响（P＞0.05）；4．平板集落形成实验显示，10ng／ml KGF作用后，HaCaT的克隆形成能力较对照组增强（P＜0.05）。高于0.25μg／ml浓度的反义序列1和反义序列2均可抑制KGF介导的HaCaT细胞的集落形成能力增强（P＜0.05），抑制作用呈浓度依赖性(IC50依次为：1.7μg／ml、1.9μg／ml)。正义序列对集落形成能力无抑制作用（P＞0.05）；5．流式细胞仪检测结果表明：HaCaT细胞存在KGFR

论文目录:

英文缩写注释

摘要

ABSTRACT

1.前言

2.实验材料

2.1 仪器和器皿

2.2 细胞及生物试剂

2.3 其它化学试剂

3.实验目的、方法、结果和讨论

3.1 第一章：KGF对HaCaT细胞增殖影响

3.1.1 实验1 MTT法检测KGF对HaCaT细胞增殖的影响

3.1.2 实验2 KGF对HaCaT细胞生长曲线的影响

3.1.3 实验3 KGF对HaCaT细胞集落形成率的影响

3.1.4 讨论

3.2 第二章：KGFR反义寡核苷酸的设计、合成以及转染效率评价

3.2.1 实验1 KGFR反义寡核苷酸的设计、合成及HaCaT细胞转染

3.2.2 讨论

3.3 第三章：KGFR反义寡核苷酸对HaCaT细胞增殖的影响

3.3.1 实验1 MTT法检测KGFR反义寡核苷酸对HaCaT细胞增殖的影响

3.3.2 实验2 KGFR反义寡核苷酸对HaCaT细胞生长曲线的影响

3.3.3 实验3 KGFR反义寡核苷酸对HaCaT细胞集落形成的影响

3.3.4 实验4 KGFR反义寡核苷酸对HaCaT细胞KGFR表达的影响

3.3.5 讨论

3.4 第四章：KGFR反义寡核苷酸对HaCaT细胞细胞周期和凋亡的影响

3.4.1 实验1 流式细胞仪检测KGFR反义寡核苷酸对HaCaT细胞细胞周期和凋亡的影响

3.4.2 讨论

3.5 第五章：KGFR反义寡核苷酸对HaCaT细胞PCNA表达的影响

3.5.1 实验1 流式细胞仪检测KGF及其受体反义寡核苷酸对HaCaT细胞PCNA表达的影响

3.5.2 讨论

4.全文小结

文献综述

一 反义寡核苷酸技术及其在皮肤科的应用(论文相关综述)

二 银屑病生物学治疗新进展(论文相关综述)

三 银屑病严重度评价方法及其应用的回顾(非论文综述)

博士期间发表论文

致谢

发布时间: 2006-10-13

参考文献

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