抗磺胺嘧啶抗体制备及磺胺嘧啶酶联免疫分析方法的初步建立

论文摘要

分别用碳二亚胺法、戊二醛和重氮化法制备磺胺嘧啶(SD)与牛血清白蛋白(BSA)、甲状腺球蛋白(Tg)的联结物，作为包被和免疫原，进而制备出抗SD的抗体。两批兔抗磺胺嘧啶多克隆抗体亲和常数分别为2.5×10~9L／mol、2.9×10~9L／mol，与磺胺二甲嘧啶交叉反应率＜0.2％，与磺胺喹恶啉交叉反应率＜0.01％；另外获得了四株抗磺胺嘧啶单克隆抗体SD2D5、SD3E8、SD3E12、SD4D11，其中SD2D5、SD4D11单克隆抗体亲和常数分别为1.4×10~9L／mol、4.0×10~9L／mol，与磺胺二甲嘧啶交叉反应率＜0.1％，与磺胺喹恶啉交叉反应率＜0.01％。研究并建立了不同模式的磺胺嘧啶联免疫分析方法，并对多种方法的包被、标记、反应条件等进行了初步探索。本工作为今后进一步开发磺胺嘧啶免疫分析试剂盒奠定了基础。其中利用单抗SD2D5，采用间接竞争二抗法，羊抗鼠二抗1gG标记辣根过氧化物酶，建立了酶联免疫分析两步法测定SD在动物源食品中的残留，方法学鉴定结果表明灵敏度为0.023ng／mL，批内变异＜15％，批间变异＜20％，稀释实验表明，测定值与稀释度呈线性相关，相关系数0.995。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 主要缩略词
• 第一章 引言
• 1.1 课题研究的目的和意义
• 1.1.1 兽药残留危害
• 1.1.2 磺胺类药物概述
• 1.1.3 各国磺胺类残留标准
• 1.1.4 磺胺类药物残留的检测方法
• 1.2 国内外研究现状
• 1.2.1 国外相关研究进展
• 1.2.2 国内研究现状
• 1.3 研究内容及基本原理
• 1.3.1 磺胺嘧啶免疫原的研制
• 1.3.2 制备多克隆抗体及单克隆抗体杂交瘤细胞的原理及方法
• 1.3.3 酶联免疫分析方法的建立
• 第二章 抗磺胺嘧啶抗体的制备及鉴定
• 2.1 仪器、材料和试剂
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要材料和试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 免疫原的制备
• 125I-SD的制备'>2.2.2¹²⁵I-SD的制备
• 2.2.3 抗SD多克隆抗体的制备
• 2.2.4 单克隆抗体的制备
• 2.2.5 抗磺胺嘧啶抗体的鉴定
• 2.2.6 抗体的提纯
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 多克隆抗体的的鉴定
• 2.3.2 单克隆抗体的的鉴定
• 2.3.3 抗磺胺嘧啶单克隆抗体（SD4D11）在RIA中的初步应用
• 2.4 讨论
• 2.4.1 半抗原的联接方法及免疫原的选择
• 2.4.2 多抗、单抗亲和性的讨论
• 第三章 磺胺嘧啶酶联免疫分析方法的初步建立
• 3.1 仪器、材料和试剂
• 3.1.1 主要仪器
• 3.1.2 主要材料和试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 标准品的配制
• 3.2.2 磺胺嘧啶酶联免疫分析（包被抗体模式）方法的建立
• 3.2.3 磺胺嘧啶酶联免疫分析（包被抗原模式）方法的建立
• 3.2.4 方法学鉴定
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 磺胺嘧啶酶联免疫分析（包被抗体模式）方法的建立
• 3.3.2 磺胺嘧啶酶联免疫分析（包被抗原模式）方法的建立
• 3.3.3 方法学鉴定
• 3.4 讨论
• 3.4.1 相同单抗在放射免疫分析和酶联免疫分析不同
• 3.4.2 包被抗体和包被抗原方法的比较
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢