论文摘要
第一部分:小鼠干扰素诱导蛋白IFIT1多克隆抗体的制备目的:获取小鼠IFIT1 （ Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1）特异性多克隆抗体,为深入研究IFIT1的结构和功能奠定基础。方法:扩增培养高效表达IFIT1的重组子pMAL-C2X-IFIT1,超声破碎后的细胞上清过Amylose Pre-packed column亲和层析柱,将所得纯化的融合蛋白MBP-IFIT1作为抗原,添加福氏佐机剂后免疫兔,收集抗血清,Western blot和ELISA方法测定抗血清特异性反应和效价。结果:纯化的MBP-IFIT1可诱导兔产生特异性免疫应答,所得抗体能够特异性识别融合蛋白中的IFIT1,ELISA结果显示其效价为1:12800。结论:MBP-IFIT1具有良好的抗原性,以该融合蛋白为抗原免疫兔成功制备出IFIT1特异性多克隆抗体。第二部分:小鼠多器官及细胞株干扰素诱导蛋白IFIT1的表达情况目的:观察小鼠多器官和多细胞株干扰素诱导蛋白IFIT1 RNA水平的表达情况。方法:将10只雄性正常小鼠C57/129小鼠断颈处死,取心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌提RNA。用5μg/ml的内毒素（LPS）刺激Raw264.7细胞株、3T3细胞株和10T1/2细胞株5h后,终止刺激,收集细胞提RNA,同时设定正常对照组。将提纯的RNA分别进行RT-PCR,观察IFIT1的表达情况。结果:小鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌中均表达IFIT1,且存在表达量上的差别,心表达量最高,肝与小肠比较P=0.307,其它各组织间比较P<0.05。Raw264.7细胞株、3T3细胞株和10T1/2细胞株LPS刺激5h后,均能诱导IFIT1表达,正常对照组表达为阴性。结论:IFIT1在小鼠体内为广泛表达,LPS刺激可多种细胞株表达IFIT1。第三部分:放射性损伤对小鼠干扰素诱导蛋白IFIT1及JAB1表达的影响目的:观察放射性损伤后早期小鼠肝组织IFIT1、JAB1各时相点变化特点,初步探讨创伤应激早期糖皮质激素抵抗的分子机制。方法:将20只C57小鼠,不拘雌雄,随机分为正常对照组和致伤组,致伤组采用5Gry 60Co一次性全身照射,分别于伤后1h、4h、和12h脱颈处死取肝组织。用western blot测定肝组织IFIT1、JAB1表达变化。结果:放射损伤后1h IFIT1开始增高,12h达最高,呈上升趋势,差异显著P<0.01;同时,JAB1在1h开始下降,12h降到最低,呈下降趋势,差异显著P<0.01。结论:放射损伤早期不仅引起小鼠肝组织IFIT1的显著增高,同时引起JAB1的显著下降,成相反趋势,揭示创伤应激早期糖皮质激素抵抗可能与IFIT1对其的阻遏作用和JAB1对其的正性调控有关。第四部分:颈交感神经阻滞对烧伤早期小鼠肝干扰素诱导蛋白IFIT1表达的影响目的:探讨颈交感神经阻滞（cervical sympathetic block,SB）对烧伤后早期小鼠肝脏干扰素诱导蛋白IFIT1表达的影响。方法:雄性C57/129小鼠50只,随机分为对照组和SB治疗组,TBSA 15-20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,分别于烧伤前、烧伤后1h、6h、12h和24h取肝组织,采用免疫印迹法（Western blot）观察IFIT1的蛋白表达情况。结果:对照组烧伤后肝IFIT1表达显著增高（P<0.01）,烧伤后治疗组IFIT1表达量较对照组相应时相点显著降低（P<0.01）。结论:烧伤后早期GR功能抑制可能与IFIT1负性调控有关,SB对烧伤的治疗作用可能是通过抑制IFIT1表达来实现的。
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标签：多克隆抗体论文; 融合蛋白论文; 抗原性论文; 免疫应答论文; 细胞株论文; 放射性损伤论文; 糖皮质激素抵抗论文; 颈交感神经阻滞论文; 烧伤论文;