柱前衍生化HPLC法在远志质量控制中的应用初探

论文摘要

皂苷是中药中含量较大,活性较强的一类化合物,在抗肿瘤、抗菌、治疗心血管疾病、调节机体代谢及免疫等方面有良好的效果,常作为指标性成分来评价中药的质量。但由于皂苷类化合物结构特殊,缺乏紫外特征吸收基团,常存在末端吸收问题,其测定较难进行,这也是中药质量控制的难题之一。近年来,衍生化技术发展迅速,已广泛应用于氨基酸类、脂肪酸类、生物碱类、酯类、醇类、醛类、糖类及对映体等药物的分析,也有人应用于中药中皂苷类成分的分析。因为远志皂苷是远志药材的主要活性成分,但采用现有方法较难测定,所以本课题以远志为考察对象,以远志皂苷的盐酸水解产物远志皂苷元（senegenin）为基本研究对象,采用现有仪器设备,初步探索了柱前衍生化HPLC-UV测定远志皂苷元的方法,该方法也为皂苷类成分的测定提供参考。本课题主要研究内容和方法：1.以远志药材为研究对象,考察了远志药材脱脂,远志皂苷提取、水解的条件,以及大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、中压制备柱分离制备远志皂苷元的最佳条件,并在此基础上,分离制备了远志皂苷元,然后采用紫外光谱（UV）、质谱（MS）、核磁波谱（1HNMR）等手段鉴定了远志皂苷元,最后采用HPLC-UV面积归一化法测定了远志皂苷元的纯度。2.以远志皂苷元（senegenin）为研究对象,对远志皂苷元进行衍生反应研究。主要考察了衍生试剂、衍生反应监测方法、衍生反应方式、衍生反应溶剂、衍生反应物料比、衍生反应时间等因素,最终确定了远志皂苷元的最优化衍生反应条件为：采用磁力搅拌,以二氯甲烷为溶剂,4-二甲氨基吡啶（DMAP）为催化剂,吡啶用量（体积）远志皂苷元（质量）的比例为v吡啶：m远志皂苷元=50：1,苯甲酰氯与远志皂苷元的反应物料比m笨甲酰氯：m远志皂苷元=60：1,冰水浴反应时间为1 h。此条件下远志皂苷元完全反应。3.以远志皂苷元为研究对象,在最优化衍生反应条件的基础上,合成了远志皂苷元衍生物,同时考察了硅胶柱层析、凝胶柱层析、半制备高效液相分离制备衍生物的方法,并制备远志皂苷元衍生物纯品,然后采用紫外光谱（UV）、质谱（MS）、核磁波谱（1HNMR）等手段鉴定了衍生物,其分子式为C44H53CIO8,并将其命名为2,3-二苯甲酰氧基-远志皂苷元,最后采用HPLC-UV面积归一化法测定了远志皂苷元的纯度,其纯度符合定量分析的化学对照品要求,从而为柱前衍生化HPLC-UV测定远志皂苷元提供对照品。4.在远志皂苷元衍生反应研究的基础上,初步探索了远志中远志皂苷元柱前衍生化HPLC-UV测定方法,测定色谱条件为：色谱柱：Diamonsi（钻石）C18（200mm×4.6 mm,5μm）;流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液（80：20）；流速：1.0 ml-min-1;检测波长：230 nm；柱温：室温；进样量：20μl。结果：线性方程为Y=24310X+2.116（相关系数r=0.9995）,线性范围：0.0165～0.33 mg.m1-1,最低检测浓度是0.12μg·ml-1,最低检测量为2.3 ng。该测定方法准确、灵敏度较高。本文探索的柱前衍生化HPLC-UV测定远志中远志皂苷元的方法,避免了紫外检测末端吸收困难问题,具有灵敏度高的优点,但本实验的某些方面不够完善,有待于进一步研究。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 1. 立题目的与意义
• 2. 本课题的主要研究内容和创新点
• 第二章 文献综述
• 1. 中药质量控制研究
• 1.1 中药质量控制的目的和意义
• 1.2 中药质量控制的现状
• 2. 远志研究概述
• 2.1 远志本草考究
• 2.2 化学成分研究
• 2.3 药理作用研究
• 2.4 质量标准研究
• 3. 柱前衍生化技术及其应用研究概述
• 3.1 衍生化简介
• 3.2 柱前衍生化技术及其应用
• 3.3 柱前衍生化HPLC法应用于皂苷质量控制
• 第三章 远志皂苷元的分离鉴定
• 1. 仪器与试药
• 2. 方法与结果
• 2.1 远志皂苷元的分离制备
• 2.2 远志皂苷元的表征
• 2.3 结果
• 3. 结论与讨论
• 第四章 远志皂苷元单体衍生化反应研究
• 1. 仪器与试药
• 2. 方法与结果
• 2.1 衍生反应试剂的选择
• 2.2 衍生反应条件的考察优化
• 3. 结论与讨论
• 第五章 远志皂苷元衍生物的合成分离与表征
• 1. 仪器与试药
• 2. 方法与结果
• 2.1 远志皂苷元衍生物的合成
• 2.2 硅胶柱层析分离衍生物
• 2.3 凝胶柱层析分离衍生物
• 2.4 半制备型高效液相色谱分离衍生物
• 2.5 衍生物的表征
• 3. 结论与讨论
• 第六章 柱前衍生化HPLC-UV测定远志中远志皂苷元的含量
• 1. 仪器与试药
• 2. 方法与结果
• 2.1 色谱条件
• 2.2 对照品溶液的制备
• 2.3 供试品溶液的制备
• 2.4 方法学考察
• 2.5 样品含量测定
• 3. 结论与讨论
• 3.1 样品处理中的问题
• 3.2 色谱方法中的问题
• 3.3 关于本实验的不足之处
• 第七章 结论与展望
• 1. 结论
• 2. 展望
• 3. 硕士期间掌握的主要技术和学习心得
• 参考文献
• 攻读学位期间取得的研究成果
• 致谢