一株产几丁质酶细菌的鉴定、酶的性质及其基因的克隆与表达

论文摘要

几丁质酶（chitinase Ec．3．2．14）能够催化几丁质水解为几丁寡糖和N-乙酰氨基葡萄糖，广泛存在于各种微生物、植物及动物细胞和组织中，参与多种生理过程。由于几丁质酶在生物防治和处理几丁质废物等方面具有巨大的应用潜力，因而受到广泛的重视。 为了充分利用产几丁质酶微生物在生物防治中的潜力，作者用蛆蝇源几丁质作为筛选培养基，从土壤中初筛到51株产几丁质酶微生物，并通过生物测定法，复筛到一株对蝗虫有较高致死率的细菌C4。此外，通过观察蝗虫的中肠组织切片进行了初步的组织病理学研究。研究发现在饲喂经几丁质诱导的C4菌液12小时后，蝗虫的中肠围食膜基本被破坏；在48小时后，中肠组织出现明显的组织病理症状。为确定该菌的分类地位，对细菌C4进行了形态学观察、生理生化指标测定及分子生物学鉴定。16S rDNA序列分析显示该菌与Sanguibacter，Oerskovia和Cellulomonas三个属有较高的序列同源性，同源性分别为95.2-96.1％、95.4％和93.6-95.2％。结合表型特征和16S rDNA序列分析，细菌C4最接近Sanguibacter属，因此初步将其归为Sanguibacter属，命名为Sanguibacter sp．C4。分别将经几丁质诱导的C4菌液（酶活力：1.16 U／mL）和未诱导的菌液饲喂蝗虫，诱导组蝗虫的死亡率（61.1％）明显高于未诱导组(35.6

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 产几丁质酶细菌C4的筛选及鉴定
• 摘要
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 实验结果
• 3.1 菌种的初筛和复筛
• 3.2 回复感染
• 3.3 组织病理学研究
• 3.4 细菌C4的表型特征
• 3.4.1 菌体形态及培养特征
• 3.4.2 生理生化指标
• 3.5 16S rDNA序列分析
• 3.5.1 16S rDNA的克隆及测序
• 3.5.2 系统发育分析
• 3.6 生物测定
• 4 讨论
• 第二章 产几丁质酶细菌C4发酵条件的研究
• 摘要
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 实验结果
• 3.1 碳源的筛选
• 3.2 氮源的筛选
• 3.3 超始pH对产酶的影响
• 3.4 温度对产酶的影响
• 3.5 培养基装量对产酶的影响
• 3.6 培养时间与与产酶的关系
• 3.7 产酶培养基配方的优化
• 4 讨论
• 第三 细菌C4产几丁质酶的纯化及性质研究
• 摘要
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 实验结果
• 3.1 细菌C4产几丁质酶的纯化
• 3.2 细菌C4产几丁质酶的性质
• 3.2.1 酶的分子量与等电点
• 3.2.2 金属离子对酶活性的影响
• 3.2.3 温度和pH值对酶活性的影响
• 3.2.4 酶的底物特异性及动力学常数
• 3.3 酶切产物分析
• 3.3.1 薄层层析
• 3.3.2 质谱分析
• 3.4 细菌C4产几丁质酶的生物测定
• 4 讨论
• 第四章 细菌C4产几丁质酶Chi58基因的克隆与表达
• 摘要
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 实验结果
• 3.1 几丁质酶片断chi-F的序列分析
• 3.2 几丁质酶chi58基因的克隆和序列分析
• 3.2.1 几丁质酶chi58基因的克隆和测序
• 3.2.2 几丁质酶chi58基因的同源性分析
• 3.3 几丁质酶Chi58基因的生物信息学分析
• 3.3.1 信号肽序列分析
• 3.3.2 保守结构域分析
• 3.3.3 酶的三维结构预测
• 3.4 细菌C4产几丁质酶Chi58基因的表达
• 3.4.1 表达载体pChi58的构建
• 3.4.2 融合蛋白Trx-chi58的表达
• 3.5 融合蛋白Trx-chi58表达条件的初步优化
• 3.5.1 诱导时间对Trx-chi58表达的影响
• 3.5.2 IPTG浓度对Trx-chi58表达的影响
• 3.5.3 诱导温度对Trx-chi58表达的影响
• 3.6 表达产物的可溶性及活性分析
• 4.讨论
• 结论
• 综述：微生物几丁质酶的研究进展
• 在读期论文发表情况及获奖情况
• 致谢