论文摘要
芦笋（Asparagus officinalis Linn）为百合科天门冬属的多年生草本植物,学名石刁柏。芦笋作为一种食用和药用价值都很高的经济作物,其主要活性成分有皂苷、多糖、黄酮、氨基酸类,各活性成分都有其相应的药理学作用。前期实验表明、芦笋皂苷对体外培养的HepG-2细胞具有抑制作用,并对于其线粒体途径进行了研究,证实了芦笋皂苷可通过线粒体途径诱导HepG-2细胞凋亡。本文在前期工作基础之上以凋亡蛋白DR4、DR5/TRAIL为切入点,对芦笋皂苷诱导细胞凋亡的死亡受体途径进行了探讨。流式细胞仪检测结果表明,50 mg·L-1、100 mg·L-1、200 mg·L-1的芦笋皂苷分别作用HepG-2肿瘤细胞48h后,DR4、DR5/TRAIL的表达均升高,且随芦笋皂苷浓度的增加而增加,呈一定的剂量依赖性关系。DR4、DR5/TRAIL介导的死亡受体通路可因Caspase-8未能激活而被抑制,因此有DR4、DR5、TRAIL表达并不能说明就有DR4、DR5/TRAIL介导的凋亡。酶标法检测表明,50 mg·L-1、100mg·L-1、200 mg·L-1的芦笋皂苷分别作用HepG-2细胞48h后Caspase-8和Caspase-3活性均升高,且随着芦笋皂苷剂量的增加而增加。以上结果表明,芦笋皂苷诱导肿瘤细胞凋亡的途径可能为死亡受体途径：首先通过上调DR4、DR5/TRAIL蛋白的表达,激活上游的启动Caspase—Caspase-8,从而激活下游的效应Caspase—Caspase-3,诱发细胞凋亡。为证明芦笋皂苷的诱导HepG-2细胞凋亡存在死亡受体途径和线粒体途径共同作用的结果,本文还对细胞凋亡两种途径的联系蛋白Bid进行了测定。流式细胞仪检测结果表明,50 mg·L-1、100 mg·L-1、200 mg·L-1的芦笋皂苷分别作用HepG-2肿瘤细胞48h后,Bid蛋白的表达明显升高,并成一定的剂量依赖关系。可激活Bcl-2家族中Bid,使胞浆中的Bid活化,活化的Bid蛋白可通过下调Bcl-2蛋白表达,减弱其抑制细胞凋亡的作用,或者通过上调Bax促进凋亡蛋白,增强其诱导细胞凋亡的作用,进而诱导线粒体中Cyt-c的释放,Cyt-c从线粒体释放进入胞浆,从而进入线粒体凋亡途径,最终两条途径在Caspase-3处汇合,最终导致细胞凋亡。综上所述,芦笋皂苷可通过诱导死亡受体途径的DR4、DR5/TRAIL蛋白的表达,以Bid为联系蛋白进入线粒体途径诱导HepG-2细胞凋亡。