绿僵菌的分离鉴定及其对椰心叶甲的致病性

论文摘要

绿僵菌是一类重要的虫生真菌,能防治许多农林害虫。以绿僵菌作为生防因子的生物防治是控制椰心叶甲危害的重要措施。为获得适于田间应用的高毒力绿僵菌菌株,以及探索利用绿僵菌防治椰心叶甲的有效途径,本文包括了如下方面研究,从椰心叶甲僵虫和土壤样品中分离绿僵菌,并对分离菌株进行鉴定;测定部分分离菌株的生物学特性及其对椰心叶甲的毒力,以期从中获得高毒力优良菌株;确定不同寄主和地理来源的菌株系统发育关系并测定其对椰心叶甲的致病性,以期确定不同种绿僵菌菌株的致病性差异;测定拟除虫菊酯杀虫剂与绿僵菌混用对椰心叶甲的联合毒力,以期了解菌药混用对椰心叶甲的致死效果;分析不同菌株蛋白酶和几丁质酶活性与其对椰心叶甲毒力的相关性,以期探索一种高毒力菌株的筛选方法。主要研究结果如下:1.分别从椰心叶甲僵虫和土壤样品中获得了4个和36个绿僵菌菌株,实验结果表明,用添加650mg/L多果定和500mg/L氯霉素的选择性培养基可有效地从土壤中分离绿僵菌。2.所分离的40个绿僵菌菌株中20个为金龟子绿僵菌小孢变种Metarhizium anisopliae var.anisopliae,其余菌株为金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae。基于ITS1-5.8S-ITS2的rDNA序列数据所构建的最大简约树将Dz01菌株聚在金龟子绿僵菌小孢变种分支上,从而在分子水平上支持了该菌株为金龟子绿僵菌小孢变种。3. JF86C、JF883、JF813E等3个菌株在菌落生长速率、分生孢子萌发率、分生孢子耐热性等生物学性状上表现良好,且对椰心叶甲的毒力较其余5个供试菌株高,由此获得了3个适于进一步田间试验的菌株。4.不同变种的绿僵菌菌株对椰心叶甲致病性差异明显,其中金龟子绿僵菌小孢变种菌株对椰心叶甲致病性均较强,金龟子绿僵菌蚱蜢变种和黄绿绿僵菌瘿绵蚜变种菌株中仅个别菌株能感染椰心叶甲。这为高毒力菌株的进一步筛选提供了重要指导。5. 2种拟除虫菊酯杀虫剂与绿僵菌混合液对椰心叶甲协同致死效果显著优于单独绿僵菌悬浮液或低浓度拟除虫菊酯杀虫剂溶液,而且在低浓度下拟除虫菊酯杀虫剂与绿僵菌相容性较好,这为田间开展菌药混用防治椰心叶甲提供了重要信息。6.蛋白酶活性可作为不同绿僵菌菌株毒力高低的参考指标,但不能代替生物测定。几丁质酶活性与不同菌株对椰心叶甲成虫的LT50无相关性,但与其对幼虫LT50呈正相关,其原因有待进一步研究。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 1. 文献综述
• 1.1 绿僵菌研究进展
• 1.1.1 绿僵菌的分类现状
• 1.1.2 绿僵菌分类鉴定方法
• 1.1.3 绿僵菌的应用
• 1.1.4 绿僵菌遗传改良研究进展
• 1.1.5 绿僵菌的致病机理研究进展
• 1.2 椰心叶甲研究进展
• 1.2.1 椰心叶甲发生与危害
• 1.2.2 椰心叶甲为害特点
• 1.2.3 椰心叶甲生物学特性
• 1.2.4 椰心叶甲的天敌
• 1.2.5 椰心叶甲防治方法
• 1.3 课题研究的目的、意义和主要内容
• 2. 绿僵菌的分离和纯化
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 从椰心叶甲僵虫分离绿僵菌
• 2.1.2 从土壤样品中分离绿僵菌
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 从椰心叶甲僵虫分离出的绿僵菌
• 2.2.2 从土壤样品中分离出的绿僵菌
• 3. 分离菌株的鉴定和系统发育分析
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 培养基
• 3.1.2 不同菌株形态学特征观察
• 3.1.3 Dz01 菌株系统发育分析
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 不同菌株形态学特征的观察
• 3.2.2 Dz01 菌株系统发育分析
• 4. 部分菌株生长性状和致病性的测定
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 供试菌株
• 4.1.2 培养基
• 4.1.3 部分菌株生长性状的测定
• 4.1.4 部分菌株对椰心叶甲的致病性测定
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 不同菌株生长性状的测定
• 4.2.2 部分菌株对椰心叶甲致病性的测定
• 5. 不同来源绿僵菌菌株的系统发育分析和致病力测定
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 供试菌株
• 5.1.2 不同来源绿僵菌菌株形态特征的观察
• 5.1.3 供试菌株系统发育分析
• 5.1.4 不同来源绿僵菌菌株对椰心叶甲的致病性测定
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 14 个绿僵菌菌株形态特征的观察
• 5.2.2 绿僵菌菌株rDNA-ITS 区扩增与测序结果
• 5.2.3 基于rDNA-ITS 区序列构建的绿僵菌系统发育树
• 5.2.4 不同来源菌株对椰心叶甲的致病效果
• 6. 绿僵菌与杀虫剂的联合毒力测定
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 供试菌株及杀虫剂
• 6.1.2 不同浓度的杀虫剂溶液的配制
• 6.1.3 绿僵菌孢子粉的制备与孢子悬浮液配制
• 6.1.4 供试虫的采集
• 6.1.5 椰心叶甲成虫对杀虫剂敏感性观察
• 6.1.6 试验的设置
• 6.1.7 数据统计分析
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 椰心叶甲成虫对杀虫剂敏感性观察
• 6.2.2 绿僵菌与拟除虫菊酯杀虫剂对椰心叶甲的作用效果
• 7. 不同菌株蛋白酶活性和几丁质酶活性与毒力相关性分析
• 7.1 材料与方法
• 7.1.1 供试菌株
• 7.1.2 培养基与处理液的配制
• 7.1.3 平板制备
• 7.1.4 菌株的接种和培养方法
• 7.1.5 透明圈观察
• 7.1.6 不同菌株对椰心叶甲的毒力
• 7.1.7 数据统计分析
• 7.2 结果与分析
• 7.2.1 不同菌株蛋白酶活性与其对椰心叶甲毒力的相关性分析
• 7.2.2 不同菌株几丁质酶活性与其对椰心叶甲毒力的相关性分析
• 7.2.3 绿僵菌不同变种菌株蛋白酶活性比较
• 7.2.4 不同变种绿僵菌菌株几丁质酶活性比较
• 8 讨论
• 8.1 绿僵菌的分离
• 8.2 分离菌株的鉴定
• 8.3 部分菌株的生长性状和对椰心叶甲的致病性测定
• 8.4 不同来源绿僵菌菌株系统发育分析及其毒力
• 8.5 绿僵菌与拟除虫菊酯杀虫剂的联合毒力测定
• 8.6 绿僵菌蛋白酶及几丁质酶活性作为评价其对椰心叶甲毒力的指 标的可靠性分析
• 9. 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢