高糖和胰岛素对肾小球系膜细胞GLUT4、CAP表达及细胞骨架的改变

论文摘要

目的：探讨高糖、胰岛素对肾小球系膜细胞GLUT4和CAP的mRNA表达及细胞骨架蛋白F-actin的影响，进一步研究糖尿病肾病发生发展中GLUT4及其下游分子F-actin和CAP的重要作用。 方法：将培养的大鼠1097系膜细胞株分为8组，正常对照组，生理浓度胰岛素组(10-9M)，低浓度胰岛素组(10-8M)，高浓度胰岛素组(10-6M)，高糖组（30mM），甘露醇组，高糖加高浓度胰岛素组，高糖加生理浓度胰岛素组。本研究采用半定量RT-PCR法和免疫组化法，观察高糖刺激，不同浓度胰岛素作用下，鼠1097系膜细胞中GLUT4和CAP mRNA的表达及其变化。Rhodamine-phalloidin染色，激光共聚焦显微镜观察F-actin形态并测定荧光强度。同时采用免疫组化法测定系膜细胞GLUT4的表达，从细胞分子水平探讨高糖、胰岛素干预下，GLUT4与Cbl／CAP信号通路及相关信号分子对GLUT4易位及葡萄糖转运的影响。 结果：正常对照组系膜细胞中GLUT4和CAP mRNA有一定表达。高糖组GLUT4 mRNA和CAP mRNA表达明显下降；F-actin解聚增加。甘露醇组中二者无明显变化。不同浓度胰岛素组系膜细胞GLUT4mRNA和CAP mRNA表达随胰岛素浓度增加而增加。GLUT4表达与F-actin荧光强度相关系数为0.929（P＜0.01）。GLUT4 mRNA表达与CAP mRNA相关系数为0.905（P＜0.01）。

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