猪SCAP和INSIG家族基因的克隆、染色体定位及生物学特征研究

论文摘要

目的: 通过对猪的脂肪和胆固醇代谢相关基因,包括SCAP、INSIG1和INSIG2的克隆、染色体定位及其生物学特征的鉴定,探讨猪的脂肪沉积的分子机理,为这些基因的功能研究奠定基础。 方法: 1 通过同源比较法,设计用于扩增特异基因的引物; 2 利用RT-PCR技术,扩增特异基因的cDNA片段; 3 利用5’和3’RACE技术,获取特异基因的5和3’末端cDNA序列; 4 对特异基因的扩增产物进行回收、克隆和测序; 5 利用RT-PCR技术,获取特异基因的组织表达谱; 6 通过基因组PCR获取特异基因的基因组序列; 7 利用辐射杂交板技术,对特异基因进行染色体定位。 结果: 1.本研究获得了505 bp的INSIG1部分编码区以及143 bp的INSIG1差异剪接体（INSIG1 variant 3）。该差异剪接体由野生型INSIG1（INSIG1 variant 1）发生292 bp的缺失所造成。猪INSIG1序列所编码的INSIG1蛋白质序列和人INSIG1有97.6%的同源性。RT-PCR检测表明INSIG1在心、肝、脾、肺、肾、肠、睾丸、脑、脂肪和肌肉中均有表达。INSIG1差异剪接体的表达在心脏和肌肉中没有检测到。对人、大鼠和小鼠EST数据库的检索和对小鼠来源的RNA进行的RT-PCR检测表明,该差异剪接现象存在于在人和猪中,而在啮齿类动物中没有发生。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 综述
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 1.1 RNA和cDNA样品
• 1.2 DNA样品
• 1.3 培养基 工具酶和试剂盒
• 1.4 菌株
• 1.5 主要生化试剂的配制
• 1.6 主要仪器设备
• 1.7 主要分子生物学软件
• 2 方法
• 2.1 猪 INSIG家族和 SCAP基因的分离
• 2.2 DNA序列同源性检索鉴定
• 2.3 猪 INSIG和 SCAP基因的染色体定
• 2.4 用 Rapid Amplification of cDNA Ends （RACE） 方法获取基因的全长cDNA及序列分析
• 2.5 用半巢式PCR扩增方法获取INSIG2拟基因的5’侧翼序列
• 2.6 猪INSIG家族和SCAP基因的组织表达谱分析
• 结果与分析
• 1 INSIG1基因cDNA片断的分离、序列分析与鉴定
• 1.1 猪INSIG1及其差异剪接体的部分cDNA的特异扩增
• 1.2 猪INSIG1氨基酸序列分析
• 1.3 INSIG1差异剪接体在其他物种中的检测
• 1.4 INSIG1内含子序列的扩增结果
• 1.5 猪 INSIG1及其差异剪接体的组织表达谱
• 2 INSIG2基因cDNA片断的分离、序列分析与鉴定
• 2.1 INSIG2的部分cDNA的特异扩增及其 RACE扩增
• 2.2 INSIG2的全长编码区的分析鉴定
• 2.3 猪 INSIG2氨基酸序列分析
• 2.4 INSIG2内含子的扩增结果及其序列分析
• 2.5 猪 INSIG2的组织表达谱
• 3 INSIG2拟基因的鉴定
• 3.1 INSIG2拟基因的扩增及其序列分析
• 3.2 INSIG2拟基因在其他物种中的检测
• 3.3 INSIG2拟基因的表达分析
• 3.4 INSIG2拟基因5’端上游序列的获得
• 4 猪SCAP全长cDNA和基因组序列的获得及其差异剪接体的分离鉴定
• 4.1 SCAP的部分cDNA的特异扩增及其 RACE扩增结果
• 4.2 猪 SCAP的全长cDNA的分析鉴定
• 4.3 猪 SCAP氨基酸序列分析
• 4.4 猪 SCAP内含子序列扩增及其基因组结构分析
• 4.5 人和猪 SCAP基因组结构的比较分析
• 4.6 猪 SCAP差异型剪接体的分离鉴定
• 4.7 SCAP差异剪接体在其他物种中的检测
• 5 INSIG1、INSIG2、INSIG2拟基因和 SCAP的染色体定位
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 研究生在读期间论文发表情况
• 致谢
• 附录
• 附录1 猪 SCAP基因组序列
• 附录2 部分本研究获得的基因序列及其 GENBANK序列注册号