辛伐他汀对心肌肥大钙通道表达的影响及其机制研究

论文摘要

目的:研究辛伐他汀（simvastatin, SIM）对心肌肥大钙通道表达的影响,并探讨其作用机制。方法:（1）整体实验:雄性SD（sprague-dauley）大鼠随机分为五组,即假手术组（Sham组）、腹主动脉缩窄组（AAC组）、腹主动脉缩窄+维拉帕米组（AAC+Ver组,维拉帕米10mg·kg-1·d-1）、腹主动脉缩窄+辛伐他汀组（AAC+SIM组,辛伐他汀10mg·kg-1·d-1）、腹主动脉缩窄+辛伐他汀+甲羟戊酸组（AAC+SIM+MVA组,辛伐他汀10mg·kg-1·d-1及甲羟戊酸50mg·kg-1·d-1）。分别于术后1天给各用药组动物灌胃给药,并在术前及术后不同时间点测定大鼠尾动脉收缩压（systolic blood pressure, SBP）;采用超声心动图检测各组动物心脏构型及射血功能;应用微量考马斯亮兰法测定心室总蛋白含量;称重并计算心脏指数等心肌肥厚指标;应用生物化学方法检测心肌SOD和MDA等氧自由基代谢的变化;同时应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫印迹法（western blot）分别分析心肌L-型钙通道亚单位Cav1.2（α1C）、T-型钙通道亚单位Cav3.1（α1G）、Cav3.2（α1H）mRNA及其蛋白表达的变化。（2）心肌细胞培养实验:采用血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ, AngⅡ）诱导制备新生SD大鼠心肌细胞肥大模型,随机分为五组,即对照组（Control组）、AngⅡ组、AngⅡ+Ver组、AngⅡ+SIM组、AngⅡ+SIM+MVA组。采用改良Lowry法测定心肌细胞总蛋白含量;采用相差显微镜和HJ2000通用图像分析系统测定心肌细胞表面积;应用CCK-8法检测心肌细胞细胞活力的变化;应用western blot分析心肌细胞L-型钙通道亚单位Cav1.2（α1C）、T-型钙通道亚单位Cav3.1（α1G）、Cav3.2（α1H）蛋白表达的变化;应用激光共聚焦显微镜技术,以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,检测[Ca2+]i的变化。结果:1.腹主动脉缩窄大鼠SBP升高,HW/BW比值、LVW/BW比值、IVS及LVPW厚度增加,FS及EF均明显下降,心室总蛋白含量增加,心肌形态明显肥厚。SIM处理后可明显降低腹主动脉缩窄大鼠SBP、HW/BW比值、LVW/BW比值、IVS及LVPW厚度、心室总蛋白含量,同时FS明显升高,其效果与钙通道阻滞剂Ver作用相似。2.腹主动脉缩窄大鼠心肌组织T-型钙通道亚单位α1G、α1H的蛋白表达增加,α1G、α1H mRNA表达水平升高。分别应用SIM、Ver处理后,均能明显降低T-型钙通道亚单位α1G、α1H mRNA和蛋白的表达。SIM、Ver对腹主动脉缩窄大鼠心肌L-型钙通道亚单位α1C mRNA表达水平及蛋白表达均无明显影响。3.腹主动脉缩窄大鼠心肌组织SOD活性明显下降,MDA含量升高,心肌抗氧化能力下降。分别应用SIM、Ver处理后,均能明显提高心肌组织SOD活性,降低MDA含量,心肌的抗氧化能力增强。4. AngⅡ可诱导心肌细胞总蛋白含量及细胞表面积的增加,造成心肌细胞肥大,并引起心肌细胞细胞活力降低。分别应用SIM、Ver处理后均能明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞总蛋白含量及细胞表面积的增加,同时提高心肌细胞的细胞活力。5. AngⅡ诱导心肌细胞肥大可以引起T-型钙通道亚单位α1G、α1H的蛋白表达增加。分别应用SIM、Ver处理后,均能明显降低T-型钙通道亚单位α1G、α1H的表达。AngⅡ对心肌细胞L-型钙通道亚单位α1C的蛋白表达无明显影响。6. AngⅡ诱导的心肌细胞肥大可引起细胞内钙离子超载。应用SIM处理后,SIM可呈剂量依赖性抑制心肌细胞肥大所致的钙离子超载,其中SIM 10-6-4μmol/L作用明显,其效果与钙通道阻滞剂Ver作用相似。结论:1.腹主动脉缩窄能导致大鼠心肌肥大。SIM对腹主动脉缩窄所致的心肌肥大具有明显的防治作用,其作用机制可能与其抑制T-型钙通道亚单位α1G、α1H mRNA和蛋白的重新表达有关,但与L-型钙通道亚单位α1C mRNA和蛋白表达无关。2. AngⅡ可诱导培养的大鼠心肌细胞肥大。SIM对AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大具有明显的防治作用,其作用机制可能与其抑制T-型钙通道亚单位α1G、α1H的蛋白表达增加有关,同时与抑制细胞内钙超载密切相关,但与L-型钙通道亚单位α1C蛋白表达无关。

论文目录

• 英文缩略词表（Abbreviation）
• 中文摘要（Abstract in Chinese）
• 英文摘要（Abstract in English）
• 前言（Introduction）
• 材料和方法（Materials and Methods）
• 结果（Results）
• 讨论（Discussion）
• 结论（Conclusion）
• 参考文献（References）
• 综述（Review）
• 综述参考文献（References）
• 致谢（Acknowledgements）
• 获奖情况（Prize Information）