论文摘要
目的:对垂盆草预防败血症具有很好活性的部位进行筛选,并探讨其对脂多糖和D-氨基半乳糖诱导败血症性休克小鼠的保护作用。方法:①雄性ICR小鼠,随机分为正常组,模型组,阳性组(地塞米松),垂盆草氯仿层组、垂盆草乙酸乙酯层组、垂盆草正丁醇层组和垂盆草水层组进行。7组小鼠,每组5只。采用D-氨基半乳糖(D-GalN) 700mg/kg和脂多糖(LPS)50μg/kg联合造模的方法,给药后1h经腹腔注射方式给予D-GalN和LPS。通过观察小鼠48 h存活率筛选出垂盆草中对败血症起保护作用的有效层。②筛选后采用上述相同的方法,通过试剂盒检测各项指标,对有效层的抗败血症活性进行测定,分别灌胃给药及腹腔注射给药观察结果,于造模后1.5h取血测定肿瘤细胞坏死因子(TNF-a)和白介素-2(IL-2)的含量。造模8h后取血,分离血清,取上清液测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力和一氧化氮(NO)含量。③综合运用正相硅胶柱色谱法、反向硅胶柱色谱法,葡聚糖凝胶柱色谱法,高效液相色谱(HPLC)法,高速逆流色谱(HSCCC)法等多种分离手段对垂盆草水提取物正丁醇有效部位进行追踪分离和结构鉴定得到化合物Ⅰ-Ⅶ。④培养巨噬细胞RAW264.7,进行细胞活性实验观察结果,然后将化合物Ⅱ-Ⅶ按50μM或25μM给药,用脂多糖100ng/ml诱导巨噬细胞,测定NO、PGE2活性和TNF-a含量。结果:①体外D-GalN/LPS模型小鼠存活率实验中,垂盆草正丁醇层给药组存活率在造模后12 h后达到80%,在24、36、48 h后也能够达到60%,因此确定垂盆草中对败血症性休克小鼠起保护作用的有效部位存在于正丁醇层。②垂盆草正丁醇层浸膏灌胃给药及腹腔注射给药均显著抑制脂多糖和D-氨基半乳糖脂诱导败血症性休克小鼠血清AST和ALT的升高,具有明显的预防败血症作用。③垂盆草正丁醇层综合运用1H-NMR,13C-NMR等波普数据鉴定出垂盆草正丁醇有效部位中分离得到的7个单体化合物。④体外细胞毒性实验表明:垂盆草正丁醇层提取物无细胞毒性,2种化合物对LPS刺激后的巨噬细胞所产生的各种炎性介质因子具有显著性抑制。具有抗炎的效果,对败血症起到保护作用。
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