论文摘要
本论文运用植物细胞培养技术，以荒漠肉苁蓉（Cistanche deserticola Y．C．Ma）种子作为外植体，诱导出愈伤组织，进行继代培养，建立了稳定的荒漠肉苁蓉愈伤组织和细胞悬浮培养体系；较系统研究了多种前体化合物和真菌诱导子对荒漠肉苁蓉悬浮培养细胞干重（Dry Weight,DW）、苯乙醇苷（Phenylethanoid Glycosides,PeGs）含量和松果菊苷（Echinacoside,Echin）含量的影响。在本研究条件下，对培养物进行了质量控制和体外抗氧化活性初步研究。愈伤组织最佳培养条件为：MS+YE 800mg／L+NAA1．0mg／L+6-BA1．5mg／L+2,4-D0．5mg／L+蔗糖30g／L+琼脂6．5g/L，pH值：5．8，光照时间：12h／d，光照强度：58．4μmol·m-2·s-1，培养温度：26±1℃。实验结果表明，新鲜的浅黄色疏松肉苁蓉愈伤组织为次生代谢物高产细胞系。在培养的第24d细胞干重达到最大12．720 gDW／L，PeGs和Echin含量在第20d达到最大值，分别为11．467和6．041mg/g。细胞悬浮培养条件为：MS+YE 800 mg/L+NAA 2．0 mg／L+6-BA 0．5 mg／L+2,4-D 0．2mg／L+蔗糖30g／L，pH值：5．8，光照时间：12h／d，光照强度：58．4μmol·m-2·s-1，培养温度：26±1℃，摇床转速：110rpm，接种浓度：3．2gDW／L。实验结果表明，悬浮培养条件下细胞干重、PeGs及Echin含量均在20d达到最大，分别为8．108 gDW／L、12．105和5．980mg/g。研究表明真菌诱导子的添加能促进肉苁蓉悬浮细胞干重、PeGs及Echin含量的提高。选用的6种真菌诱导子中以真菌番茄霉菌（Cladosporium fulvum,C.fulvum）最佳，在细胞生长的第16d加入浓度为80 mg/L的C.fulvum，6d后取样测得肉苁蓉悬浮细胞干重、PeGs及Echin含量均达到最大值，分别为14．055gDW／L、18．981和7．230mg/g。研究表明在肉苁蓉悬浮培养细胞第0d，联合加入前体L-苯丙氨酸和L-酪氨酸比单独加入效果更好。联合添加0．330g／L L-苯丙氨酸和0．362g/L L-酪氨酸，第20d取样，细胞干重、PeGs和Echin含量分别为12．320gDW／L、48．500和20．180mg/g。本研究在前体饲喂和真菌诱导子的联合作用实验中，肉苁蓉细胞悬浮培养第0d加入0．330g／L L-苯丙氨酸和0．362g／L L-酪氨酸，培养到第16d时，再加入80mg／L的C.fulvum，继续培养，到第22d取样。细胞干重、PeGs及Echin含量均达到最大值，分别为14．691gDW／L、50．547和23．860mg/g，分别是不添加任何前体和诱导子的1．812、4.176和3．990倍。同时，PeGs和Echin含量分别是野生肉苁蓉的6．230、7．187倍。结果表明前体和诱导子的联合作用能显著提高肉苁蓉细胞悬浮培养体系中次生代谢物的含量。采用抑制肝微粒体脂质过氧化产物丙二醛（Malondialdehyde,MDA）生成的方法，首次对比研究肉苁蓉细胞悬浮培养物和野生肉苁蓉的抗氧化活性。通过对脂质过氧化产物MDA的检测，结果表明肉苁蓉细胞悬浮培养物的抗氧化活性随浓度的增加而增强，当肉苁蓉细胞悬浮培养物和野生肉苁蓉醇提物浓度为0．04mg／mL和0．2mg／mL时，都具有很强的抗氧化活性，能够抑制MDA的生成。
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