烧伤脓毒症大鼠血清诱导的巨噬细胞中Nrf2的表达

论文摘要

目标:将内毒素及细菌感染烧伤大鼠后,制备出不同组别的血清,研究由各组血清诱导巨噬细胞中Nrf2的表达。我们的主要目标是研究当某些细菌或内毒素及烧伤等因素损害巨噬细胞后,Nrf2如何表达。方法:此项研究中,实验分为两组进行:（1）动物模型（2）细胞模型。在动物模型中,将Wistar大鼠作为实验鼠分1.标准组2.LPS组3.单纯烧伤组4.铜绿假单胞菌组5.金黄色葡萄球菌组。将除对照组外的其余四组均放置于90度开水中18秒制备成40%面积的深二度烧伤创面。在以上四组中,分别将金黄色葡萄球菌0.8ml（浓度为8×109cuf/ml）、绿脓杆菌0.5ml（含菌量为1×108cuf/ml）,注入大鼠腹腔,将6mgkg-1LPS静脉注射到大鼠体内。8小时后通过心脏穿刺收集血液并经过离心制成血清。细胞模型实验中,巨噬细胞264.7作为靶细胞,取上述血清干扰后,通过RT-PCR和WESTERN BLOT技术,研究Nrf2在靶细胞和上清中的表达。结果:所有的5组血清干扰细胞中,在RT-PCR和Western Blot两种实验中的Nrf2均有显著表达。在RT-PCR结果中Nrf2 mRNA表达水平较高体现在单纯烧伤组（81.190±3.833）,其次分别为LPS组（71.883±2.243）、绿脓杆菌组（65.708±2.975）、金葡球菌组（60.525±3.512）,而正常对照组Nrf2 mRNA表达相对较低（40.985±3.0921）;在Western-Blot实验中,Nrf2蛋白表达相对较高的为LPS组（97.733±3.274）,其次分别为单纯烧伤组（89.800±2.900）、绿脓杆菌组（80.066±2.059）、金葡菌组（73.333±3.082）。而正常对照组Nrf2蛋白表达相对较低（68.333±3.521）。结论:当受到细菌或内毒素及烧伤损害干扰后,内源性抗氧化系统出现于巨噬细胞RAW264.7中,提示Nrf2可能成为治疗严重烧伤合并MODS、脓毒症休克等的新方法。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• Introduction
• Abbreviations
• Materials and Methods
• Experimental animal
• Pathogen and endotoxin
• Reagents
• Equipments
• Design burn model
• Design burn sepsis model
• Design cell model
• RT-PCR
• Primer design
• RNA extraction and identification from serum
• Determination of RNA concentration and quality
• Preparation of experimental reagents
• Synthesis of first chain cDNA（RT reaction）
• PCR amplification
• Electrophoresis and analysis of result
• WESTERN BLOT
• Preparation of protein
• Preparation of SDS-PAGE
• Hermetization and hybridization
• Image analysis
• Statistical analysis
• Result
• 260/OD₂₈₀value of total RNA'>Extracted OD₂₆₀/OD₂₈₀value of total RNA
• PCR product sequencing:
• Semi quantitative RT-PCR measurement of Nrf2 mRNA
• Western Blot detection of Nrf2 protein expression level
• Discussion
• Conclusion
• References
• Review
• Acknowledgments
• Academic achievements