益精口服液质控分析及耐缺氧作用机理研究

论文摘要

益精口服液系兽医名方“归芪益母汤”（《牛经备要》）加味裁化而来。归芪益母汤由中药黄芪、当归、益母草煎制而成,其单味诸药具有保护心血管系统、免疫调节、耐缺氧、抗氧化及祛血脂等作用。兽医临床上该复方主要用于家畜产科疾病,但近年来许小琴等研究证明其具有提高小鼠耐缺氧的作用。该研究显示,小鼠灌服归芪益母汤后,耐常压、氰化钾缺氧存活时间分别由对照组的38.29min、2.52min显著提高到56.68min（P<0.01）、8.59min（P<0.01）;小鼠腹腔注射归芪益母汤注射液后,耐常压、减压缺氧时间分别由37.21min、14.67min提高到78.22min（P<0.01）、25.89min（P<0.01）。为了研究其作用机理,通过对益精口服液矿物元素及光谱学测定等质控分析、对大鼠脑缺血模型缺氧及自由基损伤保护等试验,旨在探讨益精口服液耐缺氧机理与抗氧化作用的内在相关性,为进一步扩展研究提供实验依据。试验一益精口服液及其单味药水提液9种元素的测定采用ICP-MS、FAAS法共测定试验组中Fe、Mn、Cu、Zn、Co、Ni、Se、Ca、Mg计9种元素含量。益精口服液经不同分离处理结果显示,其所含Co、Se、Mn、Zn、Mg元素主要以无机可溶态形式存在,Fe、Ca以悬浮有机态形式存在;与单味药水提液按相同配伍比例混合得到的单煎液相比,共煎液除Mn元素外其他元素均有不同程度的溶出增强,尤其Zn、Fe、Se含量均超过单煎液含量的1.5倍,说明共煎过程中可能发生了助溶、吸附等过程。试验二益精口服液光谱学分析采用紫外光谱、傅立叶变换红外光谱对复方益精口服液及其单味药水提成分进行图谱鉴定。结果显示,益精口服液经紫外光谱扫描后210nm处有最大吸收峰,260nm处有较大吸收峰;经傅立叶变换红外光谱扫描比对分析,1258cm-1、1053cm-1、924cm-1、867cm-1、778cm-1、599cm-1、552cm-1可作为益精口服液红外光谱特征吸收峰。与单味药水提液按相同配伍比例混合得到的单煎液相比,共煎液在866cm-1和777cm-1处出现了明显特征峰,而且1139cm-1、1053cm-1处多糖吸收峰透光率大幅降低,经分析可能有糊精成分产生。试验三益精口服液对全脑缺血及缺血再灌注大鼠脑组织抗氧化相关酶活性及HIF-1α含量的影响采用大鼠全脑缺血30min及缺血30min再灌注24h为脑缺氧及氧自由基损伤模型的试验研究,结果显示:益精口服液试验组能够显著改善缺血缺氧所致脑水肿、脑钙超载损伤以及皮层和海马总NOS、总SOD、CuZn-SOD、GSH-Px酶、Na+-K+-ATP酶活性;同时中药试验组脑皮层HIF-1α阳性细胞表达量较缺血、再灌注模型分别上升42.4%（P<0.01）、8.8%（P>0.05）。HIF-1α是缺氧条件下维持内环境稳态的关键性因子,提示益精口服液耐缺氧机理可能与其提高机体清除、抑制自由基能力进而影响HIF-1α的表达调控有关。试验四益精口服液对脑缺血及缺血再灌注大鼠脏器病变的影响通过病理切片观察发现,大鼠经益精口服液预处理后,对全脑缺血及其再灌注所致的脑神经胞体液化、心脏肌纤维溶解坏死、肺间质水肿和毛细血管充血、肾小管肿胀和上皮细胞变性、以及肝静脉淤血等损伤有保护作用;与再灌注模型相比,对缺血模型的损伤保护程度更加明显,提示益精口服液在急性脑缺血治疗方面有一定的开发价值。

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1 益精口服液相关药效学研究进展
• 1.1 益精口服液源流
• 1.2 抗疲劳作用
• 1.3 耐缺氧作用
• 1.4 抗氧化作用
• 1.5 免疫调节作用
• 1.6 循环系统影响
• 1.7 机体代谢功能影响
• 2 中药耐缺氧、抗氧化相关作用机理研究进展
• 2.1 耐缺氧作用机理
• 2.2 抗氧化作用机理
• 3 小结
• 参考文献
• 第一章 益精口服液矿物元素测定及其溶出态分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 器材
• 1.3 样品前处理
• 1.4 样品消解方法
• 1.5 ICP-MS 工作条件
• 2 结果与分析
• 2.1 单味药水提液分析
• 2.2 益精口服液元素溶出态分析
• 2.3 单煎、共煎前后元素含量变化
• 3 讨论
• 4 小结
• 4.1 单味药水提液矿物元素含量
• 4.2 单煎与共煎矿物元素含量变化
• 4.3 矿物元素不同形态含量
• 参考文献
• 第二章 益精口服液光谱学分析
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料及样品前处理
• 1.2 主要仪器
• 2 样品处理方法
• 2.1 紫外-可见指纹图谱的建立
• 2.2 红外指纹图谱的建立
• 3 结果与分析
• 3.1 紫外-可见指纹图谱分析
• 3.2 傅立叶变换红外光谱分析
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 第三章 益精口服液对全脑缺血/再灌注大鼠脑组织抗氧化相关酶活性及 HIF-1α含量的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 益精口服液制备
• 1.2 试剂和器材
• 1.3 实验动物饲养与分组
• 1.4 动物模型构建方法
• 1.5 脑采样及抗氧化相关酶活性测定步骤
• 1.6 大脑皮层HIF-1α含量测定步骤
• 2 结果与分析
• 2.1 动物模型选择依据
• 2.2 脑水肿、脑钙含量结果与分析
• 2.3 皮层和海马抗氧化酶类测定结果与分析
• 2.4 HIF-1α在大脑皮层的表达结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第四章 益精口服液对脑缺血及其再灌注大鼠脏器病变的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂及仪器
• 1.2 益精口服液制备
• 1.3 实验动物分组及处理
• 1.4 动物模型制作
• 1.5 组织石蜡切片染色步骤
• 2 各组织病理变化观察结果
• 3 讨论分析
• 3.1 脑缺血模型与炎症、非炎症损伤关系
• 3.2 脑缺血所致多器官损伤病理生理机制
• 3.3 对脑缺血损伤保护的应用优势
• 4 小结
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢