水蛭提取液对RF/6A细胞生长抑制的浓度筛选

论文摘要

目的筛选水蛭提取液对恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮（RF/6A）细胞生长抑制的最佳浓度。方法1.RF/6A细胞进行体外培养,用倒置相差显微镜,每天观察细胞形态和生长情况。细胞爬片,用SABC法进行Ⅷ因子相关抗原检测,进行细胞鉴定。2.在预实验的基础上选择终浓度分别为128mg/ml、64mg/ml、32mg/ml、16mg/ml、8mg/ml、0mg/ml的水蛭提取液,分别作用于生长良好的RF/6A细胞24h后,观察不同稀释浓度提取液对细胞贴壁及生长的影响,以MTT法测定OD值,计算细胞生长抑制率,并求出半数抑制量(IC50)。3.选择出对细胞无毒性反应的最佳抑制浓度,用于后期实验。结果8mg/ml、16mg/ml浓度组水蛭提取液对RF/6A的作用不明显,32mg/ml、64mg/ml、128mg/ml浓度组水蛭提取液对RF/6A均有明显抑制作用（P＜0.05）,但128mg/ml水蛭提取液作用后,形态学观察见细胞完全脱壁,破裂,考虑细胞毒性。故选定64mg/ml为本试验最佳药物浓度。结论体外培养的恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮（RF/6A）细胞具有一定的增殖能力,水蛭提取液对RF/6A的增殖有一定的抑制作用。64mg/ml水蛭提取液能有效抑制体外培养的RF/6A细胞,且较为安全,稳定。本实验为寻找抗眼底新生血管的中药提供了前期实验依据。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 常用中英文缩略语表
• 1 引言
• 2 实验材料
• 2.1 中药水蛭提取液的制备
• 2.2 实验试剂与配制
• 2.3 主要仪器及器材
• 3 恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞（RF/6A）的传代培养与鉴定
• 3.1 恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞（RF/6A）的传代培养
• 3.2 恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞（RF/6A）的鉴定
• 4 水蛭提取液对RF/6A增殖的影响
• 4.1 细胞生长曲线的测定（MTT法）
• 4.2 水蛭提取液对RF/6A增殖的影响
• 5 实验结果统计分析
• 5.1 统计分析
• 5.2 实验结果
• 6 讨论
• 6.1 关于RF/6A的体外培养、鉴定及细胞生长曲线
• 6.2 眼底新生血管性疾病的中医药治疗
• 6.3 关于中药水蛭
• 6.3.1 中药水蛭的药理作用
• 6.3.2 中药水蛭的毒性与浓度选择
• 7 结论
• 8 问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 附件1