松果菊苷延缓衰老作用及其机制的研究

论文摘要

衰老作为一种正常而复杂的生命过程,涉及机体的不同组织、细胞的一系列特定程序性变化。主要表现为机体对环境刺激的适应能力减弱以至丧失,出现多种器官组织功能的衰退并影响健康。关于衰老机理的学说有很多,主要包括自由基学说、衰老的端粒学说、线粒体DNA损伤学说、免疫学说、衰老的基因学说等等。这些学说从不同学科角度出发,对衰老机理进行了较为深入的探索。就目前研究进展来看,衰老是任何生命过程中的必然规律,阻止衰老是不可能实现的,但是减缓衰老速度,让人的寿命达到自然赋予的最高寿命是完全可以达到的。现代药理学表明,肉苁蓉具有延缓衰老的作用,但是对其中起到延缓衰老作用的的主要活性成分及其作用机制报道较少。为将肉苁蓉有效成分松果菊苷（ECH）进一步开发应用,本课题以D-氨基半乳糖（D-gal）诱导致衰老小鼠为模型,从不同的衰老学说方面进行数据分析,并对相关机制进行探讨。目的：松果菊苷是肉苁蓉中的主要活性成分,本实验意在探讨松果菊苷延缓衰老作用及其可能的机制。方法：3mon ICR小鼠,随机分为6组：正常组,模型组,阳性对照组,ECH低、中、高剂量组,雌雄各半。除正常组外,各组动物颈背部皮下注射10m1·kg-1的10%D-半乳糖以制备衰老小鼠模型,正常组以相同容积的生理盐水代替,每天一次,连续8周。同时,正常对照组和衰老模型组每天灌胃生理盐水,容量为20m1·kg-1,对照组每天灌胃食用油溶解的维生素E40mg·kg-1,其余三组每天灌胃20,40和60mg·kg-1松果菊苷。观察小鼠外观、行为及毛色的变化；采用跳台实验测定衰老模型小鼠学习、记忆能力；通过耐缺氧、耐疲劳实验,观察不同组别小鼠的耐缺氧时间以及负重游泳时间；酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清中IFN-γ、IL-6含量；中性红实验测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能；MTT法检测ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖转化；通过HE染色观察各组小鼠肾脏组织的病理变化；免疫组织化学染色方法检测肾脏组织中转化生长因子β1（TGF-β1）的表达；黄嘌呤氧化酶法检测脑组织超氧化物歧化酶（SOD）的活力；硫代巴比妥酸反应物（TBARS）法测定脑组织中丙二醛（MDA）含量；硝酸还原法测定脑组织中氧化氮（NO）含量。结果：1.与正常组相比,模型组小鼠出现精神萎靡、行动迟缓、毛色发黄等老化的外观特征表现；跳台实验显示学习、记忆能力降低；耐缺氧存活时间以及负重游泳时间明显降低；胸腺、脾脏指数明显升高；血清学检测显示IFN-y含量降低,IL-6含量升高；腹腔巨噬细胞吞噬能力以及淋巴细胞增殖反应能力明显降低；肾脏组织切片HE染色可见肾小球萎缩,纤维组织增生；免疫组化染色可见模型组TGF-β1平均吸光度值和阳性细胞染色百分比明显升高；脑组织的SOD活力、NO含量明显降低,MDA含量显著增加,结果有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。提示D-氨基半乳糖致衰小鼠模型造模成功。2.与模型组相比,ECH各剂量组小鼠皮毛尚可,饮食较正常,活动力强；ECH各组间的跳台学习潜伏期以及错误次数未见显著性差异（P>0.05）,ECH中、高剂量组以及维生素E组可以使衰老小鼠第一次跳下跳台的记忆潜伏期有所延长（P<0.05,P<0.01）,减少衰老小鼠记忆时的跳台错误次数（P<0.05）；ECH各剂量组能够不同程度的延长小鼠耐缺氧存活时间以及负重游泳时间（P<0.05,P<0.01）。说明ECH具有一定的改善衰老状态的作用,并且显著改善衰老小鼠的记忆能力以及应激反应能力,这些行为学结果提示ECH可能具有延缓衰老的作用。3.ECH可以剂量依赖性的提高衰老小鼠胸腺、脾脏指数（P<0.05,P<0.01）；显著提高IFN-y含量、腹腔巨噬细胞吞噬能力以及淋巴细胞增殖反应能力（P<0.05,P<0.01）；降低IL-6含量（P<0.05,P<0.01）。提示ECH可能通过调节衰老小鼠免疫能力,起到延缓衰老的作用。4.ECH各剂量组HE染色可见肾小球数目不同程度增多,纤维化程度降低；显著降低肾脏组织TGF-β1含量（P<0.05,P<0.01）；说明ECH能降低衰老小鼠肾脏组织TGF-β1,抑制ECM沉积,从而减轻衰老小鼠肾脏组织的衰老。5.ECH可以剂量依赖性的增加脑组织SOD活力和NO含量,降低MDA含量（P<0.05,P<0.01）。提示ECH可以提高抗氧化以及抑制脂质过氧化能力。结论：ECH具有一定的延缓衰老作用。其机制可能有：①调节免疫能力②降低衰老小鼠肾脏组织TGF-β1,抑制ECM沉积,减轻肾脏衰老程度。③提高抗氧化以及抑制脂质过氧化能力。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 第一部分 松果菊苷延缓衰老的作用
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 第二部分 松果菊苷延缓衰老作用机制的研究
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 参考文献
• 全文小结
• 附图
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 综述
• 参考文献