鹅正常肝脏与肥肝差异表达蛋白质检测与分析

论文摘要

鹅肥肝形成过程中,肝脏在形态与组成等方面产生了一系列变化,而这些变化的物质基础是蛋白质。本研究以12只110日龄朗德鹅为实验材料（填肥组和对照组各6只）,填肥组采用高能玉米饲料填饲,对照组正常饲喂,填饲18天后,屠宰取肝,采用蛋白质组学方法寻找正常鹅肝脏与填肥鹅肝脏中差异表达蛋白。主要研究结果如下:（1）蛋白检测实验表明银染Schevchenko法的灵敏度在50ng水平上,Blum法的灵敏度在5～50ng之间,GE法的检测灵敏度高于5ng,经典考马斯亮兰染色的检测灵敏度在0.050.5μg之间。（2）采用双向凝胶电泳分别分离朗德鹅正常肝脏和填肥肝脏组织蛋白质,GE法银染,凝胶图谱显示朗德鹅肝脏组织蛋白质多集中于pI 4-6和43.0～97.4Kda。（3）PDQuest软件进行图像分析,获得45个差异蛋白质点,对45个差异表达蛋白点进行MALDI-TOF-MS鉴定,使用国际互联网上Matrix Science公司提供的肽质量指纹图谱鉴定程序进行查询,获得11个具有研究意义的蛋白质:谷氨酸转运体,在肥肝中表达量降低,细胞外高水平的谷氨酸会可能影响鹅中枢神经系统;磷酸甘油酸变位酶与磷酸丙糖异构酶,这两种酶在肥肝中表达量降低,从蛋白质水平说明填肥鹅对能量的需求低于正常鹅;谷胱甘肽硫-转移酶,该酶在肥肝中表达量下降,表明填肥鹅肝脏清除亲脂化合物和解毒功能能力降低;鸟氨酸转氨酶,该酶在肥肝中表达量下调,表明血液中氨浓度升高,可能会对填肥鹅脑细胞造成伤害;GTP环化水解酶I,该酶在肥肝中表达量减少,表明填肥鹅血压与血液中胆固醇可能高于正常鹅;硫氧还原蛋白,该蛋白在肥肝中表达下调,表明该阶段填肥鹅肝脏细胞增殖可能降低;丝氨酸羟甲基转移酶,该酶在肥肝中表达量降低,可能导致填肥鹅基因的异甲基化和DNA修复功能异常;核苷二磷酸激酶,该酶在肥肝中表达量下降,表明填肥鹅抑制肿瘤的形成和转移能力下降;载脂蛋白E,该蛋白在肥肝中表达量降低,这可能会导致填肥鹅血浆胆固醇、三酰甘油的运输及代谢出现异常,肝脏脂类代谢异常。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 文献综述
• 1.1 肥肝形成机理
• 1.1.1 肥肝的概念
• 1.1.2 肥肝形成机理
• 1.2 蛋白质组研究进展
• 1.2.1 蛋白质组技术
• 1.2.2 蛋白质组研究的相关技术
• 1.3 蛋白质组研究的国内外现状
• 1.3.1 动物生理/病理体系或过程的比较蛋白质组学研究
• 1.3.2 肉品质的蛋白质组学研究
• 1.3.3 肝脏蛋白组学的研究
• 1.4 本研究意义和主要研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验试剂
• 2.3.1 溶液配制
• 2.4 肝脏蛋白质组样品制备及提取分离
• 2.4.1 肝脏蛋白质组样品制备
• 2.5 等电聚焦
• 2.5.1 IPG 的重水化
• 2.5.2 IPG 的IEF 电泳
• 2.6 第二向电泳（SDS-PAGE）
• 2.6.1 制胶
• 2.6.2 胶条平衡
• 2.7 染色方法
• 2.7.1 银染GE 法
• 2.7.2 银染Blum 法
• 2.7.3 银染Schevchenko 法
• 2.7.4 经典考马斯亮蓝染色法
• 2.8 SDS-PAGE 胶的保存
• 2.9 采集和分析朗德鹅肝脏蛋白质组的2-DE 胶图
• 2.10 质谱鉴定差异蛋白质
• 2.11 搜索数据库分析差异蛋白质
• 3 结果与分析
• 3.1 朗德鹅的填肥效果
• 3.2 不同上样量和染色方法对2-DE 检测灵敏度的影响
• 3.3 鹅肝脏蛋白图谱
• 3.4 朗德鹅肝脏蛋白质组的表达差异
• 3.5 数据库查询结果
• 4 讨论
• 4.1 蛋白质提取和双向电泳技术
• 4.2 质谱分析
• 4.2.1 谷胱甘肽硫转移酶
• 4.2.2 谷氨酸转运体
• 4.2.3 磷酸甘油酸变位酶与磷酸丙糖异构酶
• 4.2.4 鸟氨酸转氨酶
• 4.2.5 GTP 环化水解酶I
• 4.2.6 硫氧还原蛋白
• 4.2.7 丝氨酸羟甲基转移酶
• 4.2.8 核苷二磷酸激酶
• 4.2.9 载脂蛋白E
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的文章