论文摘要
目的:心肌梗死发生后,梗死区域立即出现中性粒细胞渗入,随后单核巨噬细胞的浸润在心肌梗死后炎症及修复中均发挥重要作用。研究发现,巨噬细胞主要分为促炎表型M1和抗炎表型M2,在心梗后随着炎症的进程表现为时间性表型偏移,如果促炎表型过度,将导致炎症范围扩大、组织损伤过度、修复不良、瘢痕增多等不良反应。B型利钠肽（B-type natriuretic peptides,BNP）是主要由心室肌细胞分泌的具有多种功能的多肽,其受体广泛存在于心、肾、脑、血管等各种组织和细胞中,通过NPRA/GC/cGMP/PKG通路调节多种生理功能。急性心肌梗死后,心室组织内BNPmRNA含量急剧升高,血浆BNP含量也同步增加。有研究表明在心肌梗死后长期和短期外源性应用重组人B型利钠肽预防和减少心室重构,改善心脏功能等有益结果。但BNP对心肌梗死后心室重构的影响其机制所在,仍是需要探索的问题。方法:1脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的THP-1源性巨噬细胞的制备;2 RT-PCR法测定巨噬细胞激不同活时间与BNP及其受体mRNA表达的关系;3酶联免疫吸附法测定BNP作用LPS诱导的THP-1源性巨噬细胞后,其细胞内的cGMP浓度的变化;4 RT-PCR法测定BNP不同用药浓度对LPS诱导的THP-1源性巨噬细胞表型标志（代表M1型巨噬细胞的标志有TNF-α、MCP-1、RANTES、IL-6、IL-12等,代表M2型巨噬细胞的标志有CCL-18、IL-10、TGF-β等）mRNA表达水平的影响;5酶联免疫吸附法测定BNP对LPS诱导的THP-1源性巨噬细胞表型标志蛋白表达水平的影响。结果:1 THP-1细胞LPS诱导前后形态学变化:THP-1细胞诱导分化前,细胞呈圆形,悬浮生长;加入100nmol/L佛波酯（phorbol myristoyl acetate,PMA）处理48h后,换新培养液,并加入1ng/mL LPS,孵育3h后,观察细胞状态,细胞由悬浮生长变为贴壁生长,变形或伸出伪足,成巨噬细胞状,即为诱导成功。2 BNP及其相关受体在脂多糖诱导的THP-1源性巨噬细胞中的表达:LPS诱导THP-1为巨噬细胞,其BNP与其1型受体（Natriuretic peptides receptor 1,NPR1）在mRNA水平上表达量出现明显上升,并于加入LPS 3h后达到高峰。3外源性BNP可引起脂多糖诱导的THP-1源性巨噬细胞中的cGMP明显升高。4外源性BNP剂量依赖性的使脂多糖诱导的THP-1源性巨噬细胞M1型向M2型在mRNA水平上发生表型偏移。5外源性BNP剂量依赖性的使脂多糖诱导的THP-1源性巨噬细胞M1型向M2型在蛋白水平上发生表型偏移。结论:1巨噬细胞被激活后BNP表达增多,其主要作用受体也明显上调。表明BNP在巨噬细胞接到的自分泌和旁分泌作用中可能发挥一定作用。2巨噬细胞激活后,外源性的BNP可能通过其信号转导通路,使细胞内cGMP含量升高,进而发挥其调节基因转录、蛋白表达等作用。3巨噬细胞激活后,外源性的BNP能剂量依赖性的使M1型发生表型偏移,使其促炎作用明显减弱,并有向M2型转化的趋向,从而发挥其抗炎等作用。