狐狸场环境气载内毒素和细菌气溶胶的检测

狐狸场环境气载内毒素和细菌气溶胶的检测

论文摘要

本研究在一年之内对两个不同的狐狸场舍内环境中气载内毒素和细菌气溶胶的含量进行了检测,同时对气载细菌内毒素和气载革兰氏阴性菌之间的相关性进行了分析;其次,对环境中气载需氧革兰氏阴性活菌菌群组成进行鉴定,并且对细菌气溶胶颗粒在Andersen-6采集器A-F6个层级上的分布进行分析,从而进一步分析狐狸舍内气载细菌对机体的呼吸系统健康的危害情况;然后通过对舍外及饲料粪便中内毒素及细菌含量的测定,对狐狸舍中气载内毒素及细菌气溶胶的来源进行了推断性分析;最后,对不同季节狐狸舍内环境中气载细菌和内毒素含量的变化进行了分析。本研究可分为四个部分:第一部分:狐狸舍内气载内毒素与细菌气溶胶的含量的测定本实验采用Andersen-6级空气微生物样品收集器,以5%公绵羊血-琼脂培养基为采样介质辅以革兰氏染色和API细菌快速鉴定系统确定狐狸舍内气载需氧、厌氧、兼性厌氧和革兰氏阴性活菌浓度;采用AGI-30空气微生物样品收集器,以50mlBET水为采样介质收集气载内毒素,并通过LAL试验确定狐狸舍内气载内毒素的含量。结果显示狐狸舍内空气中气载需氧活菌含量介于4.52×1022.87×104 CFU/m3之间,气载厌氧活菌含量介于3.50×1021.72×104CFU/m3之间,气载兼性厌氧活菌的浓度介于3.20×1021.53×104CFU/m3之间,气载需氧革兰氏阴性活菌含量介于4.07×1014.43×103CFU/m3之间,气载内毒素含量介于2.41×1012.09×103EU/m3之间。对两个不同狐狸场舍内气载内毒素含量与革兰氏阴性活菌之间的数量关系进行了统计分析,结果表明气载内毒素与气载需氧革兰氏阴性活菌浓度之间在数值上相关性不大(r1=0.54,r2=-0.262),相关系数r1、r2均不显著(P>0.05),进一步回归分析,回归方程不显著。因此,不管是通过革兰氏阴性活菌含量来指示狐狸舍环境中气载内毒素的含量,还是通过气载内毒素的含量来判断革兰氏阴性活菌含量都是不可靠的。第二部分:气载革兰氏阴性活菌的组成、含量及空气动力学分析本实验主要对狐狸舍内革兰氏阴性活菌含量及组成进行了鉴定。首先通过革兰氏染色,初步分离革兰氏阴性菌;其次,革兰氏阴性菌通过O-F试验和氧化酶实验分成肠杆菌科类和非发酵类革兰氏阴性菌,分别用API-20E和API-20NE进行鉴定,结果表明革兰氏阴性活菌占需氧活菌总数的8.43%16.61%;革兰氏阴性菌群主要包括肠杆菌科、巴氏杆菌属和假单胞菌属细菌,肠杆菌科细菌占优势,占总含量的83.2%89.4%,在肠杆菌科中大肠埃希氏菌浓度最高,假单胞菌属和巴氏杆菌属细菌占总含量的5.2%10.7%和5.4%6.1%,两个场舍均未检出厌氧革兰氏阴性活菌。狐狸场气载需氧活菌有33.8%,兼性厌氧活菌有37.8%,革兰氏阴性活菌约有24.6%分布在Andersen-6采样器的A层级上,这一级收集到的气溶胶颗粒,由于直径大,很少能进入人的鼻腔及呼吸道;气载需氧活菌有26.1%,兼性厌氧活菌有23.2%,革兰氏阴性活菌约有36.9%分布在C层级,它们能进入人、畜的气管、支气管,甚至细支气管。第三部分:狐狸舍内气载内毒素和需氧革兰氏阴性活菌来源的统计分析本实验对狐狸舍外空气及舍内饲料和粪便中内毒素、需氧活菌总数及革兰氏阴性活菌与舍内气载细菌和内毒素浓度之间的数量关系进行了统计分析。结果显示,舍内与舍外5m处气载需氧活菌、兼性厌氧活菌、需氧革兰氏阴性活菌和内毒素含量数值之间经过相关系数的显著性检验,相关性不显著(P>0.05),这说明狐狸舍内气载细菌和内毒素并不是来源于舍外,而是另有其它重要来源。对两个狐狸场舍内气载内毒素和需氧革兰氏阴性活菌浓度与饲料、粪便中内毒素和需氧革兰氏阴性活菌浓度进行相关性和回归分析。分析表明舍内空气中与饲料、粪便中需氧革兰氏阴性活菌浓度之间呈正相关(P<0.01和P<0.01;0.01<P<0.05和P>0.05),气载内毒素浓度与饲料、粪便中的有很大的相关性(0.01<P<0.05和P<0.01;P<0.01和P<0.01)。气载内毒素对饲料和粪便中内毒素浓度的回归方程均显著,而场2舍内的气载需氧革兰氏阴性活菌浓度与饲料粪便回归方程不显著。这表明粪便和饲料极有可能是舍内气载内毒素和需氧革兰氏阴性活菌的主要来源,但也不排除有其它原因。第四部分:不同季节狐狸舍内环境中气载细菌和内毒素含量的变化分析本实验对半封闭式和开放式两个狐狸场夏季、秋季、冬季三个季节的舍内气载内毒素和细菌气溶胶进行了检测,并且分析了其浓度的变化。结果显示,夏季舍内需氧革兰氏阴性活菌浓度为4.07×1013.47×103CFU/m3,内毒素浓度为2.67×1012.05×103EU/m3;秋季舍内需氧革兰氏阴性活菌浓度为4.07×1014.22×103CFU/m3,内毒素浓度为2.70×1012.09×103EU/m3;冬季舍内气载需氧活菌浓度为4.52×1022.58×104CFU/m3,需氧革兰氏阴性活菌浓度为4.58×1014.43×103CFU/m3 ,内毒素浓度2.40×1011.84×103EU/m3。气载需氧革兰氏阴性活菌基本趋势是夏季和秋季大于冬季,而气载内毒素变化不很明显,这说明狐狸舍内空气中细菌气溶胶的变化受到季节的影响,夏秋两季应当加强该季节舍内消毒及空气传播疾病的预防工作。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 引言
  • 1 微生物气溶胶
  • 2 微生物气溶胶的危害
  • 2.1 微生物气溶胶对动物养殖业的危害
  • 2.2 微生物气溶胶对人类健康的影响
  • 3 微生物气溶胶的研究进展
  • 3.1 国外研究进展
  • 3.2 国内研究进展
  • 4 气载内毒素
  • 4.1 内毒素简介
  • 4.2 气载内毒素研究进展
  • 实验一 狐狸舍气载内毒素与细菌气溶胶的检测
  • 1 材料
  • 1.1 狐狸场基本情况
  • 1.2 主要试剂、培养基
  • 1.3 主要仪器设备
  • 2 方法
  • 2.1 采集方法
  • 2.2 样品处理方法
  • 2.3 数值统计方法
  • 3 实验原理
  • 3.1 Andersen-6 级空气微生物采样器的工作原理
  • 3.2 AGI-30 空气微生物采样器的工作原理
  • 3.3 LAL 凝胶法的试验原理
  • 4 实验过程
  • 4.1 实验准备
  • 4.2 实验样本的采集
  • 4.2.1 气载内毒素样本的采集
  • 4.2.2 气载细菌样本的采集
  • 4.3 样本的处理
  • 4.3.1 预试验
  • 4.3.2 气载内毒素样本的处理
  • 4.3.3 气载细菌样本的处理
  • 5 结果与分析
  • 5.1 狐狸场1 细菌气溶胶和气载内毒素含量
  • 5.2 狐狸场2 细菌气溶胶和气载内毒素含量
  • 5.3 狐狸场1 和2 舍内气载需氧革兰氏阴性活菌占需氧活菌的比例
  • 5.4 狐狸场1 和2 舍内气载兼性厌氧活菌占厌氧活菌的比例
  • 5.5 舍内各卫生参数之间的关系
  • 5.5.1 狐狸场1 气载内毒素与革兰氏阴性菌含量的关系
  • 5.5.2 狐狸场2 气载内毒素与革兰氏阴性菌含量的关系
  • 实验二 细菌气溶胶的组成、含量的研究
  • 1 材料
  • 1.1 实验菌种来源
  • 1.2 主要试剂及培养基
  • 1.3 主要仪器设备
  • 2. 方法
  • 2.1 气载革兰氏阴性活菌的鉴定方法
  • 2.1.1 气载需氧革兰氏阴性活菌的鉴定
  • 2.1.2 气载专性厌氧革兰氏阴性菌的鉴定
  • 3 结果与分析
  • 3.1 舍内气载革兰氏阴性菌菌群构成
  • 3.2 两狐狸场舍内细菌气溶胶的空气动力学分析
  • 实验三 狐狸舍内气载内毒素和细菌气溶胶来源的研究
  • 1 材料
  • 1.1 实验狐狸舍状况
  • 1.2 主要仪器设备
  • 1.3 主要试剂、培养基
  • 2 方法
  • 2.1 实验设计
  • 2.2 样本采集
  • 2.2.1 舍内外气载内毒素采集
  • 2.2.2 细菌气溶胶采集
  • 2.2.3 粪便和饲料样本采集
  • 2.3 样本的处理
  • 2.3.1 舍外气载内毒素和细菌气溶胶含量的确定
  • 2.3.2 饲料和粪便中内毒素含量的确定
  • 2.3.3 饲料和粪便中需氧活菌、革兰氏阴性活菌及兼性厌氧活菌测定
  • 3 结果与分析
  • 3.1 舍外空气中各参数分析
  • 3.2 舍内与舍外细菌气溶胶和气载内毒素相关性分析
  • 3.3 饲料和粪便中各参数分析
  • 3.4 相关性分析
  • 实验四 不同季节狐狸场舍内气载内毒素和细菌气溶胶的变化
  • 1 材料
  • 1.1 实验狐狸舍状况
  • 1.2 主要仪器设备
  • 1.3 主要试剂、培养基
  • 2 方法
  • 2.1 实验设计
  • 2.2 气载内毒素和细菌气溶胶的采样
  • 2.3 样本的处理
  • 2.3.1 舍内气载内毒素含量的确定
  • 2.3.2 舍内气载细菌含量的确定
  • 2.4 统计分析
  • 3 结果与分析
  • 3.1 狐狸场1 不同季节的气载内毒素和细菌气溶胶的浓度
  • 3.2 狐狸场2 不同季节的气载内毒素和细菌气溶胶的浓度
  • 3.3 不同季节狐狸场1 和2 舍内气载需氧活菌浓度的变化
  • 3.4 不同季节狐狸场1 和2 气载兼性厌氧活菌浓度的变化
  • 3.5 不同季节狐狸场1 和2 气载需氧革兰氏阴性活菌浓度的变化
  • 3.6 不同季节季狐狸场1 和2 气载内毒素浓度的变化
  • 讨论
  • 1 狐狸舍内气载内毒素与细菌气溶胶
  • 1.1 气载细菌和内毒素采样方法的选择
  • 1.2 气载内毒素检测方法的选择
  • 1.3 LAL 凝胶法检测内毒素的影响因素
  • 1.3.1 操作环境及操作
  • 1.3.2 鲎试剂本身的影响
  • 1.3.3 供试品的 PH 值
  • 1.3.4 供试品的干扰
  • 1.3.5 保温时间与温度
  • 1.4 狐狸舍内气载内毒素和细菌气溶胶
  • 1.4.1 狐狸舍内气载内毒素
  • 1.4.2 狐狸舍内细菌气溶胶
  • 1.5 气载内毒素与气载革兰氏阴性细菌相关性分析
  • 2 气载革兰氏阴性菌的组成、含量及空气动力学分析
  • 2.1 气载革兰氏阴性菌的菌群组成及含量
  • 2.2 空气动力学分析
  • 3 狐狸舍内气载内毒素与革兰氏阴性菌的来源分析
  • 4 不同季节狐狸场舍内环境气溶胶
  • 结论
  • 1 狐狸舍内气载内毒素与细菌气溶胶的含量
  • 2 气载革兰氏阴性菌的组成、含量及空气动力学分析
  • 3 狐狸舍内气载内毒素和需氧阴性菌来源的统计分析
  • 4 不同季节狐狸舍内气载内毒素和细菌的变化
  • 参考文献
  • 附图
  • 致谢
  • 攻读学位期间发表论文情况
  • 相关论文文献

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