论文摘要
目的:本课题在建立热缺血死亡大鼠颈部异位心脏移植模型的基础上,通过对热缺血死亡后不同时段的大鼠心脏添加HOE642（浓度为20μmol/L）灌注,然后对移植术后供体进行如下检测:心肌细胞超微结构检查,心肌ATP、SOD、MDA的变化,RT-PCR法检测Bcl-2、Bax基因的表达,免疫组化检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,以观察HOE642对热缺血死亡大鼠尸体心脏心肌的保护作用并探讨可能机制。方法:实验分为二大部分。第一部分为大鼠颈部异位热缺血死亡心脏移植模型的建立:采用颈部Cuff法进行大鼠颈部异位心脏移植,共进行25对大鼠的实验;第二部分为钠氢离子交换抑制剂（HOE642）对热缺血死亡大鼠尸体心脏移植的影响:取清洁级SD（Sprague-Dawley）雄性大鼠,共112只,随机分成7组:每组8只,具体如下:C、正常心脏对照组;S10、心脏停搏后10分钟取心移植组;SH10、心脏停搏后10分钟取心并用HOE642灌注移植组;S30、心脏停搏后30分钟取心移植组;SH30、心脏停搏后30分钟取心并用HOE642灌注移植组;S45、心脏停搏后45分钟取心移植组;SH45、心脏停搏后45分钟取心并用HOE642灌注移植组。对实验组大鼠均采用热缺血死亡处理,取得供体后分别于S10、S30、S45组用STH-1液灌注30分钟,SH10、SH30、SH45组用STH-1液+HOE642（浓度为20μmol/L）灌注30分钟,再用颈部Cuff法进行异位心脏移植。S10、SH10、S30、SH30于移植后48小时取供心标本,S45、SH45组于移植术后去供心标本。然后对标本进行如下检测:透射电镜观察心肌组织超微结构、高效液相色谱法测定心肌细胞的ATP、RT-PCR检测心肌细胞Bcl-2、Bax基因的表达,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况并用免疫组织化学技术检测Bcl-2、Bax、Caspase-3基因蛋白水平的表达情况。所有数据以均数±标准差（（?）±s）表示,用SPSS13.0统计软件自动分析,比较两组之间的差异采用student t检验,多组间的差异比较采用方差分析;统计结果处理:以P＜0.05表示差异有统计意义（差异显著）,P＜0.01表示差异有高度统计意义（差异极显著）,而P＞0.05表示差异无统计意义（差异无意义）。结果:1、失血休克死亡濒死时间观察:大鼠腹主动脉横断放血后9～11（10.11±0.59）min,心电波消失,认为死亡。所有手术均由2人配合完成,移植手术总时间为45～75（54±3）min;其中供心准备时间4～8（6±2）min,供心移植时间3～10（4±5）min,受体准备时间12～25（17±7）min。2、实验S10、SH10、S30、SH30组颈部心脏移植术后受体均顺利存活48小时;实验S45、SH45组颈部心脏移植术后,移植心无法复跳;3、电镜检查显示:实验S10组的肌纤维间胶原纤维增生,线粒体水肿;肌纤维的肌丝结构模糊,实验SH10组的线粒体大多正常,部分线粒体轻度水肿;肌纤维走向规则,少部分肌纤维结构模糊,肌浆网扩张,病变较S10组轻。实验S30组的肌间质炎性细胞浸润;核固缩,核周水肿,肌膜下线粒体空泡化;肌丝结构模糊,线粒体排列紊乱;肌浆网扩张明显,肌间质水肿,肌纤维结构模糊;相比下实验SH30组肌细胞水肿程度较轻,胶原部分增生,线粒体水肿或空泡化程度也较轻,核固缩,核周水肿。4、S10组的ATP含量比SH10组低,差异显著（P＜0.05）;S30组的ATP含量比SH30组低,差异显著（P＜0.05）;S45组与SH45组的ATP含量无明显差异（P＞0.05）;5、本实验中S10、SH10、S30、SH30、S45、SH45组的SOD含量均比C组低,而MDA含量均比C组高;其中S10组的SOD含量比SH10组低,而MDA含量则高,差异显著（P＜0.05）;S30组与SH30组的结果比较也是如此,差异极显著（P＜0.01）;6、TUNEL法检测心肌凋亡细胞随着热缺血时间的增加而明显增多;采用RT-PCR检测Bcl-2基因的电泳图也显示实验C组的表达最强,ROD值最大,同时Bax基因的电泳图也显示实验C组的表达最弱,ROD值最小;另外通过免疫组织化学方法检测到实验组与正常组——实验C组比较,Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达水平下调,Bax蛋白表达增加,并且与热缺血时间长短呈正相关;7、TUNEL法检测S10组与SH10组心肌TUNEL阳性细胞数前者较多,且差异有显著意义（P＜0.05）;S30组与SH30组心肌TUNEL阳性细胞数前者较多,且差异有显著意义（P＜0.01）;采用RT-PCR检测Bcl-2基因的ROD值,S10组小于SH10组,S30组也大于SH30组;而Bax基因的ROD值正好相反,差异均具有统计学意义;8、通过免疫组织化学方法检测Bcl-2蛋白表达水平S10组小于SH10组,S30组也小于SH30组;而Bax、Caspase-3蛋白表达水平正好相反,差异均具有统计学意义。S45和SH45组间结果均无统计学差异。结论:1、大鼠颈部异位心脏移植模型是一种简便易行,稳定可靠的动物模型,有是进行缺血/再灌注损伤、移植免疫耐受、心肌保护等多方面基础研究的理想动物模型。2、HOE642能促进热缺血死亡后（30分钟内）大鼠心脏能量物质ATP合成增加,改善心脏的能量代谢。3、HOE642能促进热缺血死亡后（30分钟内）大鼠心脏的SOD的含量,提高清除氧自由基的能力,同时能减少MDA的生成以减轻脂质过氧化损伤。4、HOE642能抑制热缺血死亡后（30分钟内）大鼠心脏心肌细胞凋亡的发生。5、对热缺血死亡后45分钟的大鼠心脏应用HOE642的意义不大。创新点:1、热缺血死亡大鼠尸体心脏异位移植系国内首创;2、HOE642用于大鼠尸体移植心脏的保护性研究国内外均未见报道;不足之处在于:由于经费、设备的限制,检测指标不够全面;观察时间不够长。
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相关论文文献
- [1].p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在阻滞剂HOE642对肺缺血再灌注保护中的作用[J]. 中南大学学报(医学版) 2017(07)
- [2].HOE642对大鼠停跳心脏供体心肌细胞凋亡的影响[J]. 中国医学科学院学报 2008(04)
- [3].含HOE642的新型器官保存液对离体兔肺移植供肺细胞凋亡的影响[J]. 重庆医学 2018(13)