论文摘要
乙型肝炎是我国乃至全球严重的公共卫生问题之一。世界卫生组织报告，全球有20亿人感染过乙型肝炎病毒(HBV)，慢性(终生)HBV感染者超过3．5亿。在全球范围内HBV基因型别分布存在地区差异，基因型别与疾病预防控制，病情预后以及抗病毒治疗存在密切关系，同时基因变异与免疫预防接种和病情进展也有密切联系。因此进行我国乙型肝炎病毒基因分型与突变特征的研究对于了解现今我国乙型肝炎病毒的基本情况，制定相应的乙型肝炎预防控制策略和指导临床治疗提供了一定的参考依据。本研究首先对采集于12个地区的HBV血清学样品进行感染指标检测，随机选择其中表面抗原阳性的部分血清，扩增S区段并进行序列测定，通过将其与标准基因型别序列进行进化分析，确定HBV的基因型别和亚型以并通过基因序列推测血清型别，分析其分布特点。并对部分序列进行C区段的序列测定，筛选分型不一致序列，并挑选特殊型别的病毒进行全基因序列的克隆测定。为了了解HBV进化趋势和免疫接种对其序列变异影响，分别将1992年和2005年的来源于河北、河南、湖南和广西地区的低年龄和成年表面抗原阳性人群的HBV基因序列进行扩增测定。分别对1992年和2005年的低年龄人群感染的HBV基因序列中a抗原决定簇和整个大S基因变异进行比较，并分别对1992年和2005年的成年人群感染的HBV基因序列中a抗原决定簇变异情况进行比较。最后选择河南和黑龙江两地对HBV的C基因序列区段中CP和BCP常见突变进行描述和分析。本研究的最终结果显示，有913例S区序列被成功测序，进行进化分析后发现，所测基因型别涉及到A～D四种型别，其中B和C型为主要型别，地区分布特点为：北方地区以C型为主，南方以B型为主，而D型主要分布在西部。在B型中B2亚型占优势，在C型中C1和C2亚型占优势，C3和C5在广西也有发现。所测血清型别涉及ayr、ayw、adr和adw四种血清型别，其中adr和adw为主要血清型，病毒基因型与血清型有相关关系，C型与adr，B型和A型与adw，D型与ayw间有相关关系。C型基因感染个体中HbeAg阳性率有高于B型者的趋势，各地人群中a抗原决定簇分布没有规律，各地平均a抗原决定簇的变异率为12．36％。在河南和黑龙江地区2～3％的序列为B型和C型分型差异的序列，而广西地区首次在我国发现C／A重组的特殊型基因，并成功进行了全基因的序列测定，并对湖南省的一例B型基因进行了全基因克隆。在基因变异研究方面，2005年低年龄组人群中a抗原决定簇的变异序列与所测序列百分比为14．93％高于1992年低年龄组的5．8％，特别是在S抗原第145位氨基酸发生的变异序列与所测序列的百分比，2005年组为5．82％远较1992年组0．72％为高。而从成年人群看，1992年组中a抗原决定簇变异序列与所测序列百分比为9．89％，2005年组变异率为9．43％，1992年与2005年相比变化没有差别，在对比2005年与1992年低年龄人群大S基因的氨基酸变异时发现，在S抗原区段内，单基因序列的氨基酸突变率为0．62次／序列，大于1992年的0．38次／序列。HBV的C基因区段变异常见的A1762T／G1764A双位点变异和G1896A变异在河南地区的发生率为(59．49％)，黑龙江地区为(30．21％)，C型基因病毒的发生率高于B型。通过对我国不同地区的HBV基因序列的分析，和对1992年与2005年基因序列变异的对比，我们在一定程度上了解了我国HBV基因分布的特点和序列特点，了解了HBV基因变异的规律和特点，为我国乙型肝炎的疾病预防控制和治疗检测提供了参考。