论文摘要
中等纤维蛋白是细胞骨架的一种主要组成成分,并在许多组织的发育过程中交替表达和重新组装。巢蛋白(Nestin)属第六类中等纤维蛋白,在神经和肌肉的发育过程中瞬时表达。利用小鼠P19胚胎性癌细胞(Embryonal carcinoma, EC),我们详细分析了小鼠Nestin基因5’上游区的启动子序列。该基因具有三个转录起始位点,核心启动子中两个相邻的Sp1结合位点为启动子活性必需,并且转录因子Sp1和Sp3特异性结合于两Sp1位点。此外,过表达显性失活的Sp1和Sp3显著抑制了Nestin基因启动子的活性。以上结果表明通用转录因子Sp1和Sp3维持了Nestin基因的基础表达。Nestin基因的第二内含子具有中枢神经系统(Central nervous system, CNS)组织特异性增强子活性,然而负责调控该基因在神经发育过程中表达的转录因子尚不明确。利用视黄酸(Retinoic acid, RA)诱导的P19细胞体外神经分化模型,我们发现小鼠Nestin基因在神经分化过程中表达瞬时上调,这一表达变化受到位于该基因第二内含子中组织特异性增强子的调控。详细分析第二内含子中3′端320 bp的核心增强子后发现,该增强子的活性在未诱导的P19EC细胞中主要依赖于POU、HRE/RXR/TTF1和SF1位点,而在P19神经前体细胞中主要依赖于Sox、POU和HRE/RXR/TTF1位点。鸡胚电转和转基因小鼠实验均证实了小鼠Nestin基因第二内含子及其核心序列能指导报告基因在胚胎发育中的CNS特异表达,其中Sox、POU、HRE/RXR/TTF1等位点为该基因在鸡胚神经管(H.H.Stage17)中表达必需,而SF1位点为该基因在初期神经管(H.H.Stage 10)中表达必需。值得注意的是,通过对相关转录因子的表达及凝胶阻滞分析,结果提示在
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