体外诱导大鼠骨髓基质细胞转化为神经元样细胞

论文摘要

目的:体外培养骨髓基质细胞,探索大鼠骨髓基质细胞体外诱导及向神经细胞方向分化的条件,为细胞移植和进一步研究奠定基础。 方法:分离大鼠骨髓基质细胞（BMSC）并在体外进行培养、扩增、传代,相差显微镜观测细胞形态,用 MTT 法检查不同传代细胞活力,并用免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定,选择活力最强的一代细胞进行诱导实验。应用脑神经营养因子（BDNF）、2-巯基乙醇（2-ME）对细胞诱导分化,30 分钟后行大体观察,6 小时后免疫组织化鉴定神经丝蛋白（NF-200）、神经烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）,并用 rt-PCR 鉴定 NF-200、NSE、和 GFAP 的 mRNA 表达情况。 结果:免疫组化分析表明,BMSC 为 CD44 和 CD54 阳性,CD34 和 CD45阴性。用 BDNF、2-ME 单独或者共同诱导 3h BMSC 能分化为神经样细胞,伸出较长轴突和树突样突起且有分支,BMSC 形态类似神经细胞。6 小时后神经细胞标记蛋白 NSE 和 NF-200 免疫组化染色阳性而 GFAP 呈阴性,其中BDNF+2-ME 诱导组神经元样细胞分化率为 76.5%;BDNF 诱导组为 40.5%;2-ME 诱导组为 46.0%。用 rt-PCR 分析 mRNA 得到相同的结果,与对照组和其它两个实验组比较 BDNF+2-ME 组诱导率最高,差别有统计学意义（P<0.01）。 结论:通过体外培养可以获得大量高度均一的 BMSC。BDNF 和β-ME能协同刺激大鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞。

论文目录

• 摘要
• 前言
• 第一章 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 第二章 实验方法
• 2.1 大鼠BMCs分离和培养
• 2.2 体外诱导骨髓基质细胞向神经细胞分化
• 2.3 测定方法
• 2.4 逆转录-聚合酶链反应（rt-PCR）
• 第三章 结果
• 第四章 讨论
• 参考文献
• 综述
• 个人简介
• 致谢