高糖环境下小鼠卵母细胞、早期胚胎中Bcl-2表达及其意义

论文摘要

[背景与目的]:妊娠期糖尿病（GDM）约占妊娠妇女2%-8%,未及时诊断和治疗达标的妊娠合并糖尿病可引起巨大儿、胎儿畸形等,并使流产、先兆子痫及母婴围生死亡率增加,自发性流产、胎儿重要器官先天性畸形发生率高达6%-10%。研究表明妊娠合并糖尿病对胎儿的毒性作用在胚胎着床前期即已发生。近年来糖尿病致胎儿流产、畸形作用机制的研究更加深入,有研究表明GDM患者胚胎细胞凋亡指数升高,表明母体及羊水高葡萄糖环境致胎儿流产、畸形作用与胚胎细胞凋亡有关;但母体、羊水高浓度葡萄糖环境致早期胚胎细胞凋亡的作用机制尚不清楚,糖尿病对卵细胞生长发育的影响的研究报道也较少。凋亡调节重要因子Bcl-2蛋白及基因在致胎儿流产、畸形的作用及其机制的研究经检索国内外尚未见报道。本研究探讨高浓度葡萄糖环境对卵母细胞、早期胚胎生长发育的影响及其可能的机制,探讨Bcl-2基因在高浓度葡萄糖环境致早期胚胎细胞凋亡中的作用及机制。[材料与方法]材料:①卵母细胞、早期胚胎细胞,取自SPF级昆明雌性小鼠,分别在高糖、正常葡萄糖M2培养基中37℃,5%CO2培养箱中培养48h。②方法:采用免疫组化SP法检测卵母细胞和早期胚胎细胞中Bcl-2蛋白的表达;应用RT-PCR检测卵母细胞、早期胚胎中Bcl-2mRNA的表达。[结果]培养结果显示:高浓度葡萄糖环境下卵母细胞、2细胞胚泡、囊胚存活率较正常浓度葡萄糖环境低;免疫组化显示:卵母细胞、2细胞胚胎、囊胚胞浆中存在Bcl-2蛋白的表达,高糖组2细胞胚、囊胚中Bcl-2蛋白的表达较正常糖组减少,高糖组卵母细胞与正常组卵母细胞Bcl-2蛋白的表达未见显著性差异;RT-PCR检测显示:高糖组2细胞胚胎、囊胚胚泡细胞Bcl-2mRNA含量较正常组减少,与免疫组化结果一致。[结论]①高浓度葡萄糖对卵母细胞、着床前期胚胎发育存在毒性作用,促进早期卵母细胞、胚胎细胞凋亡;②高浓度葡萄糖可通过下调拮抗凋亡蛋白Bcl-2的表达来促进早期胚胎凋亡;③卵母细胞中存在Bcl-2蛋白的表达,高浓度葡萄糖对卵母细胞凋亡的影响不是通过对Bcl-2蛋白的调节来实现。

论文目录

• 目录
• 中文摘要
• 英文摘要
• 主要缩略语中英文对照表
• 前言
• 技术路线
• 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 实验动物处理和样本收集
• 2.2 卵母细胞和早期胚胎培养
• 2.3 SP法检测胚胎Bcl-2蛋白
• 2.4 SP法检测卵母细胞Bcl-2蛋白
• 2.5 SP法检测阳性对照（鼻咽癌切片）、阴性对照（正常鼻咽部组织切片）,切片来自汕头大学医学院病理教研室。
• 2.6 免疫组化结果判断
• 2.7 RT-PCR（二步法）检测小鼠胚胎mRNA
• 2.8 统计学处理
• 结果
• 讨论
• 结论
• 全文小结
• 参考文献
• 附录1:主要混合液及培养基配制方法
• 附录2:综述
• 致谢
• 个人简历