性激素水平、雄激素受体基因CAG多态性与湖北地区痤疮患者中医分型的相关性研究

论文摘要

目的 通过免疫学、分子生物学实验来探讨湖北地区痤疮患者的性激素水平、雄激素受体基因CAG多态性与该病中医辨证分型的相关性,为中医治疗痤疮及临床辨证寻找微观理论依据,同时为判断患者的预后以及积极的中西医干预治疗提供可靠证据,在一定程度上为中医辨证与西医辨病在该领域的运用提供切实可行的中西医结合的理论基础。 方法 所有病例均为武汉市第一医院皮肤科痤疮专科的湖北地区痤疮患者,所有患者均填写痤疮专科病例并编写序号,按照中医辨证收集了肝郁气滞型（93例）、湿热内蕴型（98例）。 所有受试者均在早上8-9时空服抽取外周静脉血5ml,肝素钠抗凝,3000rpm离心5min,取血清加入1.5ml Eppendorf管中,置-30℃冰箱中保存待测。女性受试者避开月经期和排卵期,选择月经前7±2天采血。采用放射免疫双抗法进行血清LH（mIU/ml）、FSH（mIU/L）、E2（pg/ml）、T（ng/ml）、PRL（ng/ml）水平的检测。 分别从肝郁气滞型、湿热内蕴型中随机抽取痤疮患者60例,即肝郁气滞型30例,湿热内蕴型30例,取上述患者的外周血1.5 ml,EDTA抗凝,用改良后的NaI法提取患者外周血白细胞的DNA,作为模板。 选择特异性外引物（P1:5’-CTT TCC AGA ATC TGT TCC AGA GCG TGC-3’;P2:5’-G GCT GTG AAG GTT GCT GTT CCT CAT-3’）扩增雄激素受体基因CAG微卫星片段(PCR反应体系为50μl,内含25mmol/L dNTP 2μl,10×PCR Buffer 5μl,1.5mmol╱L Mg2+3μl,25pmol/L引物各1μl,5U/μl Taq DNA聚合酶0.3μl,H2O33.5μl,模板DNA 5μl;PCR程序:95℃预变性5min。进入循环,94℃变性10s,65℃退火30s,74℃延伸60s,循环50次),扩增片段长度为202bp左右。1.5%的琼脂糖凝胶电泳,在紫外线灯下观察证实有PCR产物,凝胶成像系统进行分析,光学照相记录数据,将肝郁气滞型、湿热内蕴型阳性PCR产物随机分别抽取16和14例送至上海博亚生物技术有限公司用内引物（5’-AGG CAC CCA GAG GCC GCG AG-3’）进行测序。测序结果使用澳大利亚生物数据库Web Angis分析。 结果 1、血清性激素水平方面 女性肝郁气滞型痤疮患者血清性激素水平的平均值（（?）±S）分别是:LH,3.204±2.343;FSH,2.933±2.491;E2,61.439±20.879;T,0.447±0.188;PRL,18.388±4.568;LH/FSH,1.375±1.040。女性湿热内蕴型痤疮患者血清性激素水平的平均值（（?）±S）分别是:LH,2.927±2.786;FSH,4.817±4.581;E2,93.321±59.824;T,0.998±0.361;PRL,14.262±6.703;LH/FSH,0.670±0.356。两型间进行比较:LH没有显著性差异（P>0.05）;FSH、E2、T、PRL、LH/FSH均有显著性差异（P<0.01）;可见湿热内蕴型的女性痤疮患者的FSH、T的平均水平较肝郁气滞型女性痤疮患者的要高;肝郁气滞型的女性痤疮患者的PRL、LH/FSH的平均水平较湿热内蕴型女性痤疮患湖北中医学院硕十学位论文性激素水平、雄激素受体荃因CAG多态性与湖北地区瘁疮患者中医分型的相关性研究者的要高,但肝郁气滞型的女性痊疮患者的EZ的平均水平较湿热内蕴型女性痊疮思者的要低。 男性肝郁气滞型血清性激素水平的平均值（又士S）分别是:T,3.160士1.040;PRL,巧.542士4.102。男性湿热内蕴型血清性激素水平的平均值（又士s）分别是:T,5.151士1 .835;PRL,10.509士4.383。两型I’gi进行比较:T、PRL均有显著性差异（P<0.05）,可见湿热内蕴型的男性痊疮患者T的平均水平较肝郁气滞型男性座疮患者的要高;而湿热内蕴型的男性痊疮患者的PRL的平均水平较肝郁气滞型男性痊疮患者的要低。 2、雄激素受体基因CAG多态性方面 肝郁气滞型痊疮患者的雄激素受体基因CAG微卫星片段的长度的平均值是23.87士2.97;湿热内蕴型痊疮患者的雄激素受体基因CAG微卫星片段的长度的平均值是20.43士2.98,两型间进行比较雄激素受体基因CAG微卫星片段的长度的平均值有显著性差异（P<0.05）。 30例湖北地区座疮患者雄激素受体基因CAG微卫星片段长度平均值为22.27士3 .4。结论 本研究结果表明:①湖北地区的肝郁气滞型和湿热内蕴型痊疮患者的性激素水平有显著性差异,提示性激素水平与痊疮中医分型间有明显的相关性;②湖北地区的肝郁气滞型和湿热内蕴型座疮患者间的雄激素受体基因CAG微卫星片段的平均长度有所不同,提示雄激素受体基因CAG多态性与湖北地区痊疮患者中医分型之间有相关性。关键词性激素水平雄激素受体基因CAG多态性痊疮中医分型第2页共43页

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 资料和方法
• 1、实验资料
• 2、实验方法
• 3、统计方法
• 结果
• 讨论
• 1、中医对痤疮病因病机的认识
• 2、西医对痤疮发病机理的认识
• 3、性激素与痤疮发病机制的关系
• 4、性激素与痤疮中医分型的关系
• 5、雄激素受体基因CAG多态性与痤疮的关系
• 结语
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 附图