大黄素的分离纯化及其减肥降脂功能研究

论文摘要

大黄为多年生草本植物,植株高1～1.5米。根茎粗壮,因其根茎色黄而得名。通常所称的大黄主要为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根及根茎,广泛分布于陕西、湖北、四川和云南等地海拔1000米以上的山地草坡,阳光充足之处。其有效成分为含葸醌类物质大黄素（emodin）、大黄酚（chrysophanol）、芦荟大黄素（aloeemodin）、大黄酸（rhein）和大黄素甲醚（physcion）以及其衍生物。大黄在我国有45个品种和两个亚种,是我国著名的特产药材和临床常用中药之一,药用历史悠久,功效独特,其主要有泻下、保肝利胆、抗菌、抗病毒、消炎等作用,现代基础医学研究发现,大黄对降低血压,减少体内脂肪的沉积有显著作用,因此将大黄作为一种减肥降脂药物开发势必有广阔的前景,而传统的中药里面有效成分甚多,无法确定具体哪一种或几种成分在起着主要功效,这就限制了将其商品化的进程。所以,本文旨在改进大黄中有效成分的提取工艺的同时,探索大黄中起减肥降脂作用的主要成分及其作用机理。研究结果如下:（1）本文对大黄素的提取工艺进行了改进,确立了最佳工艺参数如下:在95%的乙醇为提取溶剂,在料液比1∶10,温度70℃,提取时间4小时的条件下能获得大黄素的最大提取率。（2）先利用不同pH值溶液对大黄中各个有效组分进行粗分离,然后再利用硅胶柱层析法对其进行精制,通过上述步骤所得的馏分经减压浓缩后反复重结晶,即可得到高纯度的单体活性物质。（3）大黄提取物可降低高脂饲料所致的高脂大鼠血清TC、TG、LDL-C和升高HDL-C,可明显抑制脂肪在腹腔和肝脏的沉积,减轻大鼠体重,且作用效果随大黄素的浓度呈现明显正效应关系。由此可以推断中药大黄里起减肥降脂功效的主要组分是蒽醌类物质中的大黄素。（4）大鼠胆固醇代谢实验表明大黄中有效成分主要是通过降低胆固醇的外源吸收从而达到降低血清胆固醇的目的。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 大黄简介
• 1.1 形态特征
• 2 大黄有效成分研究
• 3 大黄的生理功能
• 3.1 对胃肠消化系统的作用
• 3.1.1 泻下作用
• 3.1.2 保肝利胆作用
• 3.1.3 促进胰液分泌及抑制胰酶活性作用
• 3.2 对免疫系统的作用
• 3.3 抗菌、抗病毒、消炎作用
• 3.4 对血液循环系统的作用
• 3.4.1 降血压的作用
• 3.4.2 降血脂作用
• 3.4.3 清除氧自由基作用
• 4 蒽醌化合物的含量测定
• 4.1 比色法
• 4.2 薄层扫描法
• 4.3 高效液相色谱法
• 4.4 高效毛细管电泳色谱法
• 5 蒽醌类化合物的提取分离方法
• 5.1 溶剂法
• 5.2 碱提酸沉法
• 5.3 大孔树脂法
• 5.4 柱层析法
• 2萃取法'>5.5 超临界CO₂萃取法
• 第二章 引言
• 1 研究的目的和意义
• 2 主要研究内容
• 第三章 大黄中活性成分提取工艺研究
• 1 实验材料
• 1.1 主要仪器与设备
• 1.2 主要试剂
• 2 实验方法
• 2.1 显色剂的配制
• 2.2 标准溶液配制
• 2.3 标准曲线制备及线性范围考察
• 2.4 提取率计算方法
• 2.5 不同溶剂与大黄素提取率的关系
• 2.6 料液比与大黄素提取率的关系
• 2.7 提取温度与大黄素提取率的关系
• 2.8 乙醇浓度与大黄素提取率的关系
• 2.9 提取时间与大黄素提取率的关系
• 3 结果与讨论
• 3.1 最大吸收波长的确定
• 3.2 大黄素标准品溶液的紫外吸收标准曲线
• 3.3 提取溶剂的选择
• 3.4 最佳工艺条件的确定
• 3.4.1 料液比对提取率的影响
• 3.4.2 温度对提取率的影响
• 3.4.3 乙醇浓度对提取率的影响
• 3.4.4 提取时间对提取率的影响
• 3.4.5 正交设计优化实验
• 第四章 大黄素的纯化与精制
• 1 主要仪器与设备
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 3.1 薄层层析板的制备
• 3.1.1 CMC-Na溶液的配置
• 3.1.2 CMC-Na溶液与硅胶混合
• 3.1.3 制板
• 3.1.4 晾干
• 3.1.5 活化
• 3.2 展开液的配制
• 3.3 显色剂的配制
• 4 分离纯化技术流程图
• 5 柱层析精制
• 5.1 装柱
• 5.2 洗脱液的选择
• 5.3 重结晶溶剂的筛选
• 5.4 HPLC纯度检验
• 6 实验结果
• 6.1 不同比例洗脱液效果
• 6.2 TLC薄层检验
• 6.3 大黄素在不同溶剂中的结晶效果
• 6.4 大黄素结晶照片
• 6.5 HPLC纯度检验
• 6.6 大黄素结晶红外光谱图
• 第五章 大黄提取物减肥降脂功能研究
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要仪器与设备
• 1.3 主要试剂
• 1.4 脂肪乳剂的制备
• 2 实验方法
• 2.1 肥胖动物模型的建立
• 2.1.1 动物分组与药物剂量设计
• 2.2 观察指标及检测方法
• 2.2.1 体重的测定
• 2.2.2 Lee′s指数的测定
• 2.2.3 内脏脂肪组织重量的测定
• 2.2.4 血清总胆固醇（Total Cholesterol,TC）
• 2.2.5 血清甘油三酯（Triglycerides,TG）
• 2.2.6 血清高密度脂蛋白（High Density Lipoprotein,HDL）
• 2.2.7 血清低密度脂蛋白（Low Density Lipoprotein,LDL）
• 2.3 统计分析
• 3 实验结果
• 3.1 大黄提取物对大鼠体重及Lee′s指数的影响
• 3.2 大黄提取物对大鼠血清总胆固醇（TC）的影响
• 3.3 大黄提取物对大鼠血清总胆固醇（TG）的影响
• 3.4 大黄提取物对大鼠血清高密度脂蛋白（HDL-C）的影响
• 3.5 大黄提取物对大鼠血清低密度脂蛋白（LDL-C）的影响
• 4 讨论
• 第六章 胆固醇体内代谢试验
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要仪器与设备
• 1.3 主要试剂
• 1.3.1 脂肪乳剂的制备
• 1.3.2 胆固醇标准常备液
• 1.3.3 铁矾显色剂
• 1.3.4 50%氢氧化钾溶液
• 1.3.5 5%氯化钠溶液
• 1.3.6 胆固醇标准线制备及线性范围考察
• 2 样品测定方法
• 3 结果计算
• 4 实验方法
• 5 实验结果
• 5.1 胆固醇标准曲线
• 5.2 大鼠粪便中胆固醇排泄量
• 6 讨论
• 展望
• 参考文献
• 致谢
• 在读硕士期间所发表文章