真姬菇液体发酵工艺优化及发酵产物分析

论文摘要

真姬菇（Hypsizigus marmoreus）是一种营养丰富的食用兼药用的珍稀食用菌,也是一种极具潜力的生产品种。然而,由于传统的真姬菇栽培方式——固体菌种栽培具有周期长、效率低、商品价值低下等存在的问题,所以限制了真姬菇的工厂化和规模化发展。本研究通过正交试验等方法对真姬菇液体发酵工艺进行了优化,并与真姬菇传统固体菌种的栽培模式进行了比较,并通过化学、GC-MS化学指纹图谱等分析手段对其发酵产物化学成分进行了分析,这为真姬菇的产业化生产以及进一步开发真姬菇功能性食品提供了理论基础和应用价值。主要研究结果如下:1、研究了营养性因子对真姬菇真9603菌株深层发酵的影响,通过单因素和正交试验的方法对其生长的最适培养基进行了优化。采用深层培养方法筛选出了真9603菌株液体深层发酵较优的碳源和氮源,研究结果表明,马铃薯、葡萄糖、酵母粉有利于真姬菇真9603菌株菌丝体的生长,进一步的正交优化结果确定了真姬菇真9603菌株深层发酵最适的培养基配方为:马铃薯20%、葡萄糖3%、酵母粉0.2%、KH2PO40.1%、MgSO4·7H2O0.1%。2、采用摇瓶培养方法对真姬菇真9603菌株的深层培养条件进行了研究,结果表明,真姬菇真9603菌株深层培养的最佳条件是:摇瓶柜的转速为120r/min,培养温度20℃,起始pH值6.0-7.5（一般不需调pH值）,接种量为5mL左右（250mL锥形瓶,100mL瓶装量）,即接种量5%,摇瓶装量为100mL（250mL锥形瓶）。3、研究了真姬菇真9603菌株液体菌种培养过程中菌球数量、pH值、还原糖含量、氨基氮含量以及相关酶活性等指标的动态变化情况。研究结果表明,真姬菇液体发酵产菌球的数量和活性与其它指标具有一定的相关性。当培养液中的还原糖含量和氨基氮含量分别为0.98g/100mL和7.52mg/100mL,羧甲基纤维素酶活性和蛋白酶活性分别为7.85U和12.6U,pH为5.20时,菌球数量（60个/mL）与活性达到最高,发酵终点确定为培养后第7天。4、进行了真姬菇液体菌种与固体菌种的对比应用试验,并进行了相关的效益分析。研究结果表明,与采用固体菌种的栽培模式相比,采用液体菌种栽培具有周期短、出菇整齐、生产效率高等优势,这充分说明了真姬菇液体菌种具有良好的应用前景。接种量以每袋15mL的效果最好;在0-25℃的温度范围内,真9603菌株液体菌种的活力与保藏温度和保藏时间呈负相关,其最适贮藏温度为0-10℃,最适的保藏时间为3-9天;其液体菌种穿刺接种的日均生长2.21mm,液体菌种表面接种的日均生长1.71mm,固体菌种菌丝的日均生长1.21mm。其液体菌种穿刺接种的生物学效率可以达到64.80%,液体菌种表面接种的生物学效率可以达到63.40%,固体菌种菌丝的生物学效率仅为51.00%。真姬菇在液体菌种栽培模式下出菇比固体栽培模式下更整齐,而其它的性状差异并不明显。5、对真姬菇真9603菌株的发酵液化学成分进行初步测定,系统的预试验结果表明发酵液中含有氨基酸、蛋白质及多肽、有机酸、皂甙、黄醌及其甙类物质、内酯、香豆素及其甙类,蒽醌及其甙类、挥发油、酚类物质、强心甙、植物甾醇,三萜等物质;不含生物碱、鞣质、氰酐等物质。通过GC-MS测试,确定真姬菇真9603菌株发酵液的挥发性气体中含有烷烃类、醇类、酮类、醛类及其它类别的一些物质,其中醇类物质和酮类物质的含量相对较高,分别为7.46%和7.13%。本实验也对真姬菇真9603菌株发酵液的氯仿萃取相中的物质进行了成分鉴定,结果表明,氯仿萃取相中含有烷烃类物质,酚类物质,酯类物质,醇类物质、酮类物质和其它类别的一些物质,其中烷烃类物质和酚类物质占多数,分别为12.76%和10.63%,其中很多物质已经被证明具有良好的抗氧化、抗衰老等保健功能,这为进一步开发真姬菇功能性食品提供了一定的理论基础和应用价值。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 真姬菇概述
• 1.1.1 真姬菇简介
• 1.1.2 真姬菇的营养价值
• 1.1.3 真姬菇的生物学特性
• 1.2 国内外真姬菇的研究现状
• 1.2.1 真姬菇固体栽培的概况
• 1.2.2 真姬菇液体菌种深层培养的研究现状
• 1.2.3 真姬菇天然产物分析的研究现状
• 1.3 本课题的立题意义
• 1.3.1 本实验研究的目的和意义
• 1.3.2 本项目在研究过程中存在的问题
• 第二章 真姬菇液体发酵工艺优化的研究
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 不同真姬菇菌株生长的比较
• 2.3.2 真姬菇培养基组成的优化
• 2.3.3 真姬菇液体培养条件的优化
• 2.3.4 真姬菇液体菌种培养过程指标检测及发酵终点的分析
• 2.4 本章小结与讨论
• 第三章 真姬菇液体菌种在生产中的应用研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 真姬菇液体菌种保藏试验
• 3.3.2 真姬菇液体菌种不同接种量对菌丝生长的影响
• 3.3.3 真姬菇固体菌种和液体菌种栽培模式对比试验
• 3.4 本章小结与讨论
• 第四章 真姬菇发酵液的化学成分分析
• 4.1 引言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 真姬菇发酵液化学成分预试验
• 4.2.2 真姬菇发酵液化学成分的分析
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 真姬菇发酵液化学成分的系统预试验
• 4.3.2 真姬菇发酵液化学成分的质谱分析
• 4.4 本章小结与讨论
• 第五章 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.2 关于真姬菇液体菌种培养工艺确定的探讨
• 5.3 关于真姬菇液体菌种在生产中推广应用的探讨
• 5.4 关于真姬菇功能性食品开发前景的探讨
• 参考文献
• 附录
• 试剂
• 发酵液提取流程
• 致谢