非酒精性和混合性大鼠脂肪肝模型的建立及肝细胞刺激因子治疗效果观察

论文摘要

目的建立两种大鼠脂肪肝动物模型:高脂饲料引起非酒精性脂肪肝模型及同时给予酒精和高脂饲料建立高脂/酒精混合性脂肪肝动物模型,并探讨其机制。制造模型成功后再用肝细胞刺激因子（HSS）进行治疗,观察其疗效并探讨其作用机理。方法1.大鼠脂肪肝动物模型的建立:一组大鼠单纯饲以含20%玉米油的高脂饲料（高脂组）,另一组在饲以20%玉米油的高脂饲料的同时进行高度白酒灌胃（高脂+酒精组）,以普通饲料饲养作为对照（对照组）,6周后处死大鼠,观察体重及肝指数的变化,测定血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）水平,检测肝组织TG、丙二醛（MDA）、羟脯氨酸（Hyp）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性,肝脏标本在透射电镜、HE染色光镜下观察组织病理学改变,免疫组化检测肝组织转化生长因子β1（TGFβ1）与血小板衍生生长因子（PDGF-B）的表达情况。2.采用乳猪肝脏为材料,通过组织匀浆、超声破碎、热变性、酒精沉淀等步骤提取制备HSS。以肝源性细胞SMMC-7721为靶细胞,采用[3H]-胸腺嘧啶核苷（[3H]-TdR）掺入法对HSS活性进行鉴定。3.应用提取制备的HSS,采用高、低不同剂量对两种大鼠脂肪肝动物模型进行治疗（HSS治疗组）,以无治疗作对照（无治疗对照组）,以辛伐他汀治疗作药物对照（药物对照组）,2周后处死大鼠,观察高、低剂量HSS对血清TG、TC、AST、ALT水平、肝组织TG、MDA、Hyp含量、SOD活性、TGFβ1、PDGF-B表达及肝组织病理学的影响。结果1.高脂组大鼠血清TG（1.07±0.20 vs 0.81±0.23）、AST（211.67±44.57 vs 147.44±31.76）、ALT （73.78±11.69 vs 53.67±15.40）水平、肝组织TG（5.81±2.53vs 1.65±0.58）、MDA（19.17±5.10 vs 14.88±2.43）含量、TGFβ1（63.64% vs 9.09%）、PDGF-B（36.36% vs 0%）表达率及脂肪肝发生率（100% vs 0%）分别显著高于对照组（P均<0.05）。高脂+酒精组大鼠血清TG（1.31±0.56 vs 0.81±0.23）、TC（1.60±0.18 vs 1.35±0.18）、AST（183.00±37.40 vs 147.44±31.76）、ALT（81.78±5.17 vs 53.67±15.40）水平、肝组织TG（3.73±2.36 vs 1.65±0.58）、MDA （21.76±7.80 vs 14.88±2.43）、Hyp（0.19±0.04 vs 0.14±0.04）含量、TGFβ1 （88.89% vs 9.09%）、PDGF-B（55.56% vs 0%）表达率及脂肪肝发生率（100% vs 0%）分别显著高于对照组（P均<0.05）。高脂+酒精组脂肪性肝炎发生率显著高于高脂组（44.44% vs 18.18%,P<0.05）。2.乳猪HSS明显促进[3H]-TdR掺入肝源性细胞SMMC-7721内。3.辛伐他汀治疗与无治疗对照组比较可显著降低高脂组和高脂+酒精组大鼠血清TG （0.66±0.14 vs 0.89±0.15 / 0.69±0.21 vs 1.19±0.32）水平、肝组织TG含量（2.39±0.90 vs 6.34±2.76 / 1.74±0.84 vs 4.95±3.20）及脂肪肝发生率（100% vs 50% / 100% vs 42%）（P均<0.05）。4.高剂量HSS治疗与无治疗对照组比较,可显著降低高脂组大鼠血清AST （153.75±37.14 vs 212.63±38.03）、ALT（54.75±10.90 vs 82.75±33.47）水平、肝组织TG （3.60±2.10 vs 6.34±2.76）、MDA（14.72±2.51 vs 19.81±5.38）、Hyp（0.13±0.05 vs 0.19±0.05）含量和TGFβ1（25.0% vs 87.5%）表达率（P均<0.05）,可显著升高高脂组大鼠肝组织SOD活性（56.42±3.10 vs 47.85±5.32,P<0.01）。高剂量HSS治疗与药物对照组及低剂量HSS治疗组比较,可显著升高高脂组大鼠肝组织SOD活性（56.42±3.10 vs 48.38±3.21 / 56.42±3.10 vs 48.74±2.22,P<0.01）。低剂量HSS治疗组与无治疗对照组比较可显著降低高脂组大鼠肝组织TG含量（3.53±1.79 vs 6.34±2.76,P<0.05）。将高、低剂量HSS治疗两组合并后再与无治疗对照组比较,PDGF-B阳性率显著降低（18.75% vs 62.5%,P=0.047）。5.高剂量HSS治疗与无治疗对照组比较,可显著降低高脂+酒精组大鼠血清TG（0.69±0.27 vs 1.19±0.32）、AST（167.38±48.60 vs 222.75±53.79）、ALT （59.38±17.64 vs 102.34±21.11）水平、肝组织MDA（17.15±3.52 vs 25.95±7.25）及Hyp（0.15±0.06 vs 0.22±0.03）含量（P均<0.05）,可显著升高SOD活性（54.50±2.77 vs 45.96±4.12,P<0.01）。高剂量HSS治疗与药物对照组及低剂量HSS治疗组比较,可显著升高高脂+酒精组大鼠肝组织SOD活性（54.50±2.77 vs 50.08±4.00 / 54.50±2.77 vs 51.56±2.34,P<0.05）。低剂量HSS治疗与对照组比较可显著降低高脂+酒精组大鼠血清TG（0.71±0.25 vs 1.19±0.32）、ALT（75.38±20.19 vs 102.34±21.11）水平、肝组织MDA（17.17±3.95 vs 25.95±7.25）及Hyp（0.16±0.42 vs 0.22±0.03）含量（P均<0.05）,可显著升高高脂+酒精组大鼠肝组织SOD活性（51.56±2.34 vs 45.96±4.12,P<0.05）。将高、低剂量HSS治疗两组合并后再与无治疗对照组比较,HSS治疗可显著降低高脂+酒精组脂肪性肝炎的发生率（25% vs 75%,P=0.028）。结论1.含20%玉米油的高脂饲料能增加血清TG、AST及ALT水平,肝组织TG及MDA含量,TGFβ1及PDGF-B表达,成功建立大鼠非酒精性脂肪肝动物模型。高脂+酒精复合因素还能增加血清TC和肝组织Hyp含量,也成功建立高脂/酒精混合性脂肪肝动物模型,且病变更为严重。高脂与酒精两种因素叠加可能加重肝损害。2.采用本研究方法提取制备的乳猪HSS能有效地促进肝源性细胞增殖。3.HSS能明显降低两种脂肪肝模型大鼠血清AST、ALT水平及肝组织MDA、Hyp含量,提高SOD活性,减少肝组织TGFβ1与PDGF-B表达,减轻肝细胞脂肪变性及炎症坏死,因此其作用机制可能与HSS促进肝细胞增殖、增强肝细胞抗氧化能力、抑制胶原合成等功能有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 非酒精性和混合性大鼠脂肪肝模型的建立
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 肝细胞刺激因子的提取制备及其活性鉴定
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 HSS 治疗大鼠脂肪肝模型的疗效观察
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述