1.定州市人民医院定州073000；
2.保定市第一医院河北保定071000
【摘要】目的：探讨参麦注射液对急性白血病化疗患者骨髓单个核细胞Survivin蛋白及bcl-2/bax蛋白表达的影响。方法：将30例急性白血病患者随机分为参麦联合化疗组（试验组）和单纯化疗组（对照组），分别于化疗前、化疗第一个疗程结束后1周经骨髓穿刺采集骨髓，分离单个核细胞。采用免疫组化技术检测Survivin、bcl-2、bax蛋白表达情况。结果:白血病患者经化疗后，骨髓单个核细胞中Survivin、bcl-2蛋白表达阳性率较治疗前均显著下降（P<0.01或P<0.05），参麦联合化疗组Bax蛋白表达阳性率则显著升高（P<0.05）；参麦联合化疗组Survivin蛋白表达阳性率较单纯化疗组明显降低（P<0.05）。结论：参麦联合化疗可以显著改善白血病化疗患者细胞凋亡相关蛋白表达失衡状况，提高白血病细胞凋亡率。
【关键词】参麦注射液；急性白血病；表达
【中图分类号】R733.71【文献标识码】B【文章编号】1674-8999（2015）6-0145-01
本试验采用流式细胞术研究参麦注射液对急性白血病化疗患者骨髓单个核细胞Survivin蛋白及bcl-2/bax蛋白表达的影响，以探讨其作用机制。
1材料和方法
1.1材料
将我院及保定市第一医院30例急性白血病(AL)住院患者按入院先后顺序随机分为2组，其中参麦联合化疗组（试验组）15例，男9例，女6例，年龄17~59岁，中位年龄40岁。单纯化疗组（对照组）15例，男10例，女5例；年龄16~62岁，中位年龄39岁。以上病例均经临床、外周血、骨髓等确诊，诊断符合《血液病诊断及疗效标准》[1]。
1.2治疗方法
化疗方案：ALL用VDCP方案(长春新碱1.4mg?m2?d-1第1，8，15，22天静滴；柔红霉素35mg?m2?d-1第1~3天，第15~17天静滴；环磷酰胺600mg?m2?d-1第1天、第15天，强的松60mgd-1第1～14天，40mgd-1第15~28天口服)。ANLL用DA方案(柔红霉素35mg?m2?d-1第1~3天静滴，阿糖胞苷100mg?m2?d-1第1~7天静滴)。两组均采用上述化疗方案，同时予以辅助治疗，病房消毒隔离，用制霉菌素、庆大霉素配制漱口液或5%碳酸氢钠漱口保持口腔卫生，在骨髓抑制阶段，监测血象变化，当Hb<60g/L，PLT<20×109/L，则予以成分输血，如发生感染则采用抗生素治疗。试验组在化疗的同时加用参麦注射液100mL于5%葡萄糖液250mL中静滴，连用14d。
1.3主要试剂
浓缩型鼠抗人Bcl-2单克隆抗体、浓缩型鼠抗人Bax单克隆抗体、浓缩型鼠抗人多克隆Survivin抗体、SP-9002免疫组化染色试剂盒、APES防脱片剂、磷酸缓冲液(PBS)、淋巴细胞分离液、DAB显色剂均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.4骨髓单个核细胞中Survivin、bcl-2/bax表达测定
1.4.1骨髓单个核细胞制备及涂片：患者分别于化疗前、化疗第一个疗程结束后1周经骨髓穿刺无菌抽取2ml骨髓液(肝素钠管抗凝)，将骨髓液加等量的PBS液混匀后，用淋巴细胞分离液2000r/min离心30min。以吸管吸取吸取界面层细胞加入2倍的PBS液2000r/min离心10min，弃去上清，留取细胞再加2倍的PBS液2000r/min离心10min，弃去上清，留取细胞加PBS液制成单细胞悬液。计数有核细胞并调整细胞浓度至2×106/ml。取单个核细胞悬液10μl，滴在处理过的玻片上(即防脱片)，涂布均匀，室温晾干，用4%多聚甲醛中固定20分钟，PBS液漂洗5分钟×3次，室温下干燥过夜。用保鲜膜包裹密封后装盒，-20℃冰箱保存备用。
1.4.2测定方法：采用S-P(链霉卵白素-过氧化物酶)免疫组化法测定Survivin、bcl-2/bax表达情况。其具体方法参照试剂盒说明书进行。
1.4.3结果判断：Bcl-2阳性细胞为细胞膜/细胞浆出现黄色到棕黄色颗粒，Bax阳性细胞为细胞浆出现黄色到棕黄色颗粒。Survivin阳性细胞为细胞浆出现棕黄色或棕褐色颗粒状，计数200个细胞，阳性表达率≥20%为阳性，<20%为阴性。
1.5统计学处理
应用SPSS17.0处理数据，数据采用卡方检验进行显著性检验。
2结果
从表1可知，白血病患者经化疗后，两组骨髓单个核细胞中Survivin、bcl-2蛋白表达阳性率较治疗前均显著下降（P<0.01或P<0.05），参麦联合化疗组Bax蛋白表达阳性率则显著升高（P<0.05），表明白血病患者化疗前细胞凋亡相关蛋白表达显著失衡，细胞凋亡率显著下降。白血病患者经化疗后，参麦联合化疗组Survivin、bcl-2蛋白表达阳性率较单纯化疗组明显降低，其中Survivin蛋白表达阳性率达到显著水平（P<0.05），Bax蛋白表达阳性率较单纯化疗组明显升高，但差异不显著（P＞0.05）。表明参麦联合化疗可以显著改善白血病化疗患者细胞凋亡相关蛋白表达失衡状况，提高白血病细胞凋亡率。
3讨论
白血病是血液系统最常见的恶性肿瘤，死亡率很高。大量研究资料表明，白血病的发生、治疗疗效及耐药均与凋亡抑制基因表达增强和(或)凋亡活化基因受抑密切相关。
中药参麦注射液是中医经典方剂生脉饮经现代制剂加工而成。杨展等[2]研究表明，人参总皂甙可以明显下调K562细胞凋亡相关基因XIAP和Survivin表达，使养K562细胞后24和48小时后凋亡细胞数目明显增多。本研究发现，白血病患者化疗前细胞凋亡相关蛋白表达显著失衡，细胞凋亡率显著下降。白血病患者经化疗后，参麦联合化疗组Survivin、bcl-2蛋白表达阳性率较单纯化疗组明显降低，其中Survivin蛋白表达阳性率达到显著水平（P<0.05），Bax蛋白表达阳性率较单纯化疗组明显升高，表明参麦联合化疗可以显著改善白血病化疗患者细胞凋亡相关蛋白表达失衡状况，提高白血病细胞凋亡率。
参考文献
[1]张之南.血液病诊断与疗效标准[M].2版.北京:科学出版社，1998:168-188
[2]杨展,王旭光,吴英健,等.人参总皂甙对K562细胞凋亡相关基因XIAP和Survivin表达的影响[J].中国现代医药杂志,2009,11（2）：13-15
基金项目：
保定市科技支撑计划资助项目（09ZF087）