论文摘要
肾脏的重吸收功能主要是通过肾脏上皮细胞内的微绒毛这一重要结构而实现的。肌动蛋白聚合形成了肾脏上皮细胞内对微绒毛起支撑作用的细胞骨架,因此肌动蛋白细胞骨架的破坏势必导致肾小管上皮细胞结构和功能的改变,从而引起肾脏的重吸收功能障碍。 肾脏近端小管上皮细胞ATP缺乏是研究肾脏缺血时多种细胞骨架成分及其功能改变的良好模型。我们以往的研究表明,肾脏近端小管上皮细胞ATP缺乏时,从微绒毛脱落的肌动蛋白是和非肌动蛋白结合在一起的。然而,有关其捕获的分子机制还不清楚。 就蛋白质的功能调节而言,磷酸化是最为常见的方式。但是有关肾脏上皮细胞内肌动蛋白磷酸化以及肌动蛋白磷酸化改变对肾脏上皮细胞内细胞骨架的影响报道很少。 基于此考虑,本研究用二维电泳和免疫印迹法分离并鉴定细胞内磷酸化和非磷酸化的肌动蛋白;然后用特异性的单克隆抗磷酸化丝氨酸(或抗磷酸化苏氨酸或抗磷酸化酪氨酸)抗体确定肌动蛋白磷酸化氨基酸残基的种类,从而探讨ATP缺乏时兔肾脏近端小管上皮细胞内肌动蛋白磷酸化与肌动蛋白捕获间的关系。 本研究结果发现,兔肾脏近端小管上皮细胞在ATP缺乏时:(1) 几乎有一半被捕获的肌动蛋白处于磷酸化状态;(2) 进一步的研究发现肌动蛋白的磷酸化是发生在丝氨酸残基上的;(3) 磷酸
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