论文摘要
目的本实验通过研究碘过量和病毒dsRNA类似物Poly(I:C)对不同品系小鼠甲状腺形态和功能以及甲状腺功能、凋亡、炎症相关基因表达水平的影响,揭示不同环境因素单独和联合作用对诱发不同遗传背景个体AT影响的差异性,从而为贯彻国家“因地制宜,科学补碘”政策提供科学实验依据。方法本实验选用自身免疫性疾病(AID)敏感小鼠(NOD鼠)和非敏感小鼠(BALB/c鼠),分别随机分为4组:对照组(C)、碘过量组(HI)、Poly(I:C)组(P)、碘过量+Poly(I:C)组(HI+P)。C组饮用去离子水,腹腔注射生理盐水;HI组饮用0.05%NaI水,腹腔注射生理盐水;P组饮用去离子水,腹腔注射Poly(I:C)(按5μg/g体重);HI+P组饮用0.05%NaI水,腹腔注射Poly(I:C)。作用8周后称重、取血、处死,观测甲状腺组织大体形态,检测甲状腺绝对和相对重量;采用HE染色观察甲状腺组织形态学变化;TUNEL终端标记法检测甲状腺滤泡细胞凋亡情况;采用RIA法和ELISA法分别检测T4、TSH水平;采用RIA法检测TgAb、TPO Ab水平;采用SYBR Green实时定量PCR法,筛选两个品系各组均恒定表达的管家基因并以其为参照基因,检测功能相关基因(NIS、D1)、凋亡相关基因(TRAIL、TRAIL-sR1)及炎症相关基因(ICAM-1、CXCL10)基因相对表达水平。结果1甲状腺组织形态学变化:两个品系小鼠HI和HI+P组甲状腺较各自C组肿大,甲状腺相对重量明显增加,出现滤泡扩张,胶质潴留,NOD鼠除此之外还发生大量淋巴细胞浸润。NOD鼠HI+P组甲状腺组织结构破坏较HI组明显加重。2甲状腺滤泡细胞凋亡情况:NOD鼠HI和HI+P组均可见大量阳性着色细胞,而BALB/c鼠HI与HI+P组较C组相比凋亡细胞数量略有增加。3激素水平:两个品系小鼠HI和HI+P组T4水平较各自C组呈一定程度的下降,同时TSH水平升高;两个品系小鼠P组TSH水平较C组均呈下降趋势。4甲状腺功能、凋亡及炎症相关基因相对表达水平检测18S-rRNA在两个品系各组表达恒定,以其为参照基因检测疾病相关基因表达水平结果如下:功能相关基因(NIS、D1)表达:两个品系小鼠各处理组NIS和D1基因表达水平较各自C组均不同程度下降,NOD鼠更明显。凋亡相关基因(TRAIL、TRAIL-sR1)表达:在HI组,NOD鼠TRAIL基因表达水平较C组升高23%,而BALB/c鼠下降21%;在P组,BALB/c鼠TRAIL基因表达水平较C组下降;在HI+P组,NOD鼠TRAIL基因表达水平较C组升高50%,两个品系小鼠TRAIL-sR1基因表达水平较各自C组下降。炎症相关基因(ICAM-1、CXCL10)表达:在HI组,NOD鼠ICAM-1、CXCL10基因表达水平增加,其中CXCL10是C组7倍以上,而BALB/c鼠只有CXCL10基因表达水平增加,约为C组的2倍;在P组,两个品系ICAM-1基因表达水平均受到抑制;在HI+P组,两个品系小鼠CXCL10基因表达水平较HI组进一步升高,NOD鼠约为C组14倍。结论1碘过量可引起不同品系小鼠发生胶质潴留性甲状腺肿,甲状腺功能低下,NIS、D1基因表达受抑制。2碘过量均可引起不同品系小鼠甲状腺滤泡上皮细胞凋亡,敏感小鼠细胞凋亡水平较非敏感小鼠明显升高。3碘过量可诱发敏感小鼠甲状腺炎,而非敏感小鼠不发生,证实环境因素只是HT的诱因,遗传因素对HT发病起决定性作用。4 Poly(I:C)本身并不直接引起敏感小鼠甲状腺炎,但可加重碘过量诱发的甲状腺炎,其具体机制有待于进一步研究。5 ICAM-1和CXCL10基因表达水平的升高可能在甲状腺炎发生发展中起重要作用。
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